罗 进,杨葵华,边清泉
(绵阳师范学院化学与化学工程系,四川绵阳 621000)
摘 要: 目的:测定五种菊花中绿原酸的含量并进行比较。方法:采用HPLC法,绿原酸为考察指标, shim -pack CLC - ODS柱(4. 6mm ×250mm, 5μm) , 0. 1mol. L - 1的NaH2 PO4 - MeOH ( 7. 3: 2. 7)为流动相,检测波长为328nm。结果:五种菊花中以黄贡菊中绿原酸的含量最高(10. 6mg. g- 1 ) 。结论:不同品种菊花绿原酸含量可为选择原料药菊花提供可靠的依据。
关键词: HPLC; 菊花; 绿原酸; 含量测定
菊花为常用中药,是菊科植物菊( chrysanthe mum morifolium Ramat)的干燥头状花序。含有挥发油、黄酮类、绿原酸等多种有效成分[ 1 ] 。味甘苦,性凉;具有散风清热,平肝明目的功效,主要用于风热感冒,头痛眩晕,目赤肿痛等症[ 2 ] 。关于菊花中绿原酸含量的测定已有报道[ 3, 4 ] 。但是,关于川野菊含量的HPLC法测定及川野菊中绿原酸与其它菊花种类的比较尚未见报道,因此,本实验建立川野菊中绿原酸含量的检测方法,并与其它五种著名菊花的有效成分进行比较。供以菊花为原料的制药企业选择原料和质量检测时参考。
1 仪器和材料
1.1 仪器与试剂
日本岛津LC - 6AD高效液相色谱仪,包括SPD - 10AVP紫外检测器, CLASS - VP5. 0色谱数据处理工作站, CTD - 6A色谱柱温箱, SZ - 93二次蒸馏水仪器,绿原酸对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所) 。其它试剂均为AR级。
1.2 材料
川野菊、川金菊、杭白菊、黄贡菊、君白菊均购于绵阳天诚大药房。经本室鉴定为菊科植物菊( chrysanthe mum morifolium Ramat)的干燥头状花序。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为shim - pack CLC - ODS(4. 6mm ×250mm, 5μm) ;流动相: NaH2 PO4 - MeOH ( 713∶217) ;流速:1mL. min- 1 ;检测波长: 328nm;柱温: 30℃;进样量: 5μL;理论塔板数按绿原酸峰计大于3500。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品4. 6mg,置与100mL 容量瓶中,加水定容致刻度,得到46μg1mL - 1对照品溶液。待测。
2.3 供试品溶液的制备
样品干燥、粉碎并过60目筛,精密称取川野菊、川金菊、杭白菊、黄贡菊、君白菊、贡菊粉末1g,分别加EtOH 20mL,水浴回流2h,重复回流提取一次,合并提取液,定容致50mL, 0. 45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,待测。
2.4 标准曲线的制备
取绿原酸的对照品溶液( 46μg1mL - 1 ) ,分别进样2, 4, 6, 8, 10, 12μL,按2. 1项测定绿原酸的峰面积,以对照品进样量X (μg)对峰面积均值Y(μv1s)进行线性回归,得到直线方程Y = 31 968. 5X - 17 39819, r =9989。线性范围0. 092 - 0. 552μg。
2.5 精密度实验
分别取绿原酸对照品溶液5μL,按2. 1项连续进样5次,结果绿原酸的峰面积分别为741388, 743694, 744881, 741438, 743354. RSD = 2. 0% ( n = 3) 。
2.6 稳定性实验
取供试品溶液,每隔2h进样一次,测定绿原酸的峰面积,连续进样5次, RSD = 1. 36%,结果表明供试品溶液在8h内基本稳定。
2.7 重现性实验
精密称取川野菊粉末1g,按2. 3项制备供试品溶液,按2. 1项重复测定5份,结果绿原酸含量的RSD为312%。
2.8 回收率实验
精密吸取2. 3项下制备的川野菊样品溶液5份,分别加入适当量的绿原酸的对照品, HPLC测定( n =3) ,结果见表1。
2.9 样品含量的测定
在2.1项色谱条件下对5种供试品和对照品溶液行色谱,见图1。按外标一点法计算各样品中绿原酸的含量,结果见表2。
3 讨论
(1)检测波长的选择。在本文溶剂系统条件下DAD采集绿原酸的吸收光谱,吸收波长为328nm,紫外扫描光谱见图2。
(2)流动相的优化。文献[ 3～5 ] CH3 CN - H3 PO4( 25 ∶75 ) ; 0.1moL1L - 1 MPO4 - MeOH ( 76 ∶24 )0.1moL1L - 1NaH2 PO4 - MeOH (7∶3)等流动相体系,本实验考察对比后认为采用NaH2 PO4 - MeOH ( 713 ∶217)体系能使绿原酸与其它组分有效分离(R > 1.5) ,保留值适宜,柱后处理简便。
(3)样品中绿原酸的比较结果。由表2的数据说明,本文检测的5种菊花以黄贡菊的绿原酸的含量最高(520mg1g- 1 ) ,该结果可供菊花种植和有关生产经营企业选择菊花品种时参考。
参考文献:
[1] 黄泰康. 常用中药成分与药理手册[ Z]. 北京:中国医药科技出版社, 1994: 1565.
[2] 国家药典委员会编. 中华人民共和国药典(一部) [ S]. 北京:化学工业出版社, 2000: 254.
[3] 桑旭峰,吴海雯,徐奇超. HPLC同时测定银黄口服液中绿原酸和芩苷含量[ J ]. 中成药. 2005. 27 (1).
[4] 宁文. 菊花不同炮制品中挥发油和绿原酸含量的测定[ J ]. 广亚中医药. 2003. 26 (5) : 56～57.
[5] 李鹏,陈科力,叶从进. 湖北福田河白菊质量研究[ J ]. 中药材. 2004. 27 (2) : 102～103.
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