本文摘要：本文整理PEI转染试剂的产品特点、配置方法以及悬浮细胞转染流程，可作为实验人员进行PEI转染实验时的参考指南。
说明：本文所涉及PEI相关产品来源于KyforaBio by Polysciences。曼博生物（MineBio）是其在中国地区的独家授权供应商，长期为国内科研用户提供细胞转染技术资料与产品支持。
一、什么是PEI？
PEI（Polyethylenimine）是一类常用的非病毒细胞转染试剂，应用于细胞转染、病毒包装以及重组蛋白表达。在HEK293、CHO等细胞系统中，PEI转染因操作简便、成本较低且转染效率较高，被许多实验室用于AAV、慢病毒以及重组蛋白生产。
二、什么是PEI转染试剂？
Polysciences公司提供一系列PEI转染试剂产品，包括：
研究级产品 PEI MAX
即用型转染试剂 Transporter 5
cGMP级转染试剂 MAXgene GMP
这些产品适用于不同规模的：
AAV病毒载体生产
慢病毒（Lentivirus）包装
重组蛋白表达
抗体生产
PEI MAX是一款高浓缩粉剂，多数科研人员选择在实验室自行配置转染试剂，以获得较低成本和较高转染效率。
大量公开研究和文献表明，在以下系统中具有良好的表现：
在重组抗体与病毒载体生产中表现出良好的稳定性与可靠性。
PEI MAX是一种非GMP等级转染试剂，适用于基础科研以及药物研发早期阶段。
三、PEI MAX 40K有哪些特点？
PEI MAX 40K 是线性Polyethylenimine（PEI）盐酸盐形式，是线性PEI 25K的升级版本。
相比PEI 25K，其特点包括：
水解形式（去乙酰化）
盐酸盐形式，具有更好的水溶性
更长的连续结构片段
质子化氮水平较PEI 25K提高约11%
这些特性有助于在多种细胞系统中获得更稳定的转染效率。
四、PEI转染试剂配置方法（以PEI MAX为例）
PEI粉末配置步骤
将1 g PEI MAX 40K加入装有900 mL水的玻璃烧杯中
放入搅拌转子，在磁力搅拌器上进行搅拌
等待PEI完全溶解（约5分钟）
使用1 N NaOH调节pH至6.9–7.1
若超过7.1，可使用1N盐酸重新调节
将溶液转移至1L量筒定容至1L
使用无菌过滤膜进行过滤
分装并在4°C保存
说明
未经配制的PEI粉末有效期约为2年。
配制为溶液后：
4℃保存可稳定约6个月
若用于定性蛋白实验，可延长至约1年
五、悬浮细胞PEI转染流程
1 准备工作
转染前2~3小时，将细胞以：1×10⁶ cells/mL的密度接种到培养容器中。
2 转染步骤
以 250 mL摇瓶体系 为例：转染前细胞体积：25 mL；最终培养体积：50 mL
PEI-DNA复合物制备：
在EP管中加入2.5 mL稀释液
加入50 μg质粒DNA
轻轻混匀
加入50–200 μL PEI转染试剂
涡旋震荡5秒
静置10–15分钟形成PEI-DNA复合物
吹打混合液3次
注意事项：
加入复合物时需轻轻晃动培养瓶，使其均匀分布。
3 孵育培养
将细胞置于培养箱中培养。
一般情况下：
36–48小时：可检测到表达或病毒产生
72–96小时：可获得更高产量
六、PEI转染的常见应用
PEI转染试剂常用于以下研究场景：
HEK293细胞瞬时转染
CHO细胞重组蛋白表达
AAV病毒包装
慢病毒生产
重组抗体表达
本文总结
PEI转染是一种常见且成熟的非病毒转染方法，在HEK293和CHO等细胞系统中广泛应用于病毒载体生产和蛋白表达。
通过合理优化：
可以获得稳定且较高的转染效率。
本文介绍了PEI转染试剂的基本原理、配置方法以及悬浮细胞转染流程，可作为进行相关实验时的参考资料。
七、使用PEI转染试剂进行细胞转染实验常见问题FAQ
Q1：PEI转染适合哪些细胞？:
A1：PEI转染确实广泛应用于HEK293、CHO等哺乳动物细胞系，尤其在大规模重组蛋白表达和病毒载体（如AAV、慢病毒）生产中表现出色。我们的产品（如PEI MAX、Transporter 5、MAXgene GMP）在这些应用中经过了充分验证。
Q2：PEI转染时DNA和PEI比例是多少？
A2：通常推荐的优化范围确实是质量比1:2至1:4（DNA:PEI）。例如，在慢病毒生产的三质粒系统中，3:1（PEI:DNA）是常见的起始点。最佳比例因细胞类型、质粒系统和培养条件而异，需要通过梯度实验来确定。
Q3：PEI转染效率受哪些因素影响？
A3：一些重要的优化方向：
细胞状态：细胞的传代次数、倍增时间和健康度至关重要。
培养基与血清：转染时血清的存在与否、培养基的类型会影响复合物的形成和细胞摄取。
操作细节：PEI与DNA的混合顺序（必须将PEI稀释液滴加到DNA稀释液中）、复合物孵育时间（通常10-20分钟）、转染后处理（如换液、添加增强剂）都会影响最终结果。
试剂质量：DNA的纯度和内毒素水平是基础，PEI工作液的pH值（建议为7.0）和配制方法也直接影响性能。
技术资料来源
上海曼博生物是Polysciences中国独家官方供应商，本文部分技术资料整理自以下研究资料：您可点击此处了解PEI转染实验操作步骤与详细说明。