（以下方法仅做参考）
材料：
1、诱导表达材料：
( 1 ) LB (Luria—Bertani))培养基：
酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g
NaCl 10g 琼脂 (Agar) 1-2%
蒸馏水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0
适用范围：大肠杆菌
( 2 ) IPTG 贮备液：
2 g IPTG溶于10 mL 蒸馏水中,0 . 22 μm 滤膜过滤除菌分装成1 mL /份,-20 ℃ 保存.
( 3 ) l× 凝胶电泳加样缓冲液：
50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )
50 mmol / L DTT
2 % SDS (电泳级)
0.1 % 溴酚蓝
10 % 甘油
2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料：
1 )酶溶法
(1)裂解缓冲液：
50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )
1 mmol / L EDTA
100 mmol / LNaCI
(2)50 mmol / L 苯甲基磺酰氟(PMSF ).
(3)10 mg / mL 溶菌酶.
(4)脱氧胆酸.
(5)1 mg / mL DNase I.
2 )超声破碎法
( 1 ) TE 缓冲液.
( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液：
100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 )
100 mmol / L DTT
4 %SDS
0.2 % 溴酚蓝
20 % 甘油
实验方案：
1、外源基因的诱导表达：
(1)用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因.
( 2 )按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌.
( 3 )筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱,DNA 序列测定,
确定无误后进行下一步.
( 4 )如果表达载体的原核启动子为PL 启动子,则在30 -32 ℃ 培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6 ,迅速使温度升至42 ℃ 继续培养3 -5h ;如果表达载体的原核启动子为tac 等,则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L.继续培养3 -5h .
( 5 )取上述培养液1 mL , 1000g 离心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测.
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