上禾生物--专业的标准化植物提取物生产企业
手机或微信： 18374838656   13657416805   13548561509   
电话：0731-84213302
网站：  www.staherb.com    www.staherb.cn  
植物提取物行业网站：http://www.chinaplantextract.com/    https://natural-ingredient.net/

探讨杜仲叶醇提取物(alcohol extractive of folium eucommiae，aefe)对动脉粥样硬化(as)大鼠血管内皮细胞的保护作用。

方法 复制实验性大鼠as模型，aefe(70、140 和420 mg·kg-1·d-1，ig)给药6 w，实验结束时测定血浆一氧化氮(no)、内皮素1(et1)、血栓素b2(txb2)和6酮前列腺素f1α(6kpgf1α)的含量；取主动脉和冠状动脉进行形态学观察。

结果 aefe 140和420 mg·kg-1·d-1可明显升高as模型大鼠血浆中no、et1和6ketopgf1α浓度(p＜0.01)，而对txb2无影响；明显减轻as大鼠主动脉和冠状动脉内皮细胞的缺失,但两组间无显著差异。

结论 aefe具有维持no/et和txa2/pgi2平衡、保护血管内皮细胞结构和功能的作用。

【关键词】 动脉粥样硬化；杜仲叶；醇提取物；内皮细胞 上禾生物

杜仲具有降低血脂、平衡调节血压等功效〔1〕,近来的研究显示杜仲叶醇提取物(alcohol extractive of folium eucommiae，aefe)还可作用于内皮细胞促进一氧化氮(no)的释放〔2〕。本实验首次观察aefe对动脉粥样硬化(as)大鼠血浆no、内皮素(et)1、6酮前列腺素f1α(6ketopgf1α)、血栓素b2(txb2)水平和主动脉、冠状动脉形态的影响，探讨aefe对as大鼠内皮细胞的保护作用。

1  材料与方法

1.1  动物

雄性sd大鼠，体重200～250 g，鼠龄80～120 d。由重庆医科大学实验动物中心提供(医学动物合格证：scxk渝20020003)。

1.2  药品与试剂

aefe：根据文献〔3〕制备并浓缩至100％(相当于1 ml含生药1 g)备用，用时以0.5％羧甲基纤维素稀释；由重庆医科大学化学教研室提供并鉴定。洛伐他汀：重庆大新药业股份有限公司，批号040501。胆固醇：北京鼎国生物技术有限责任公司，批号dh061；猪胆盐：北京奥博星生物技术有限公司，批号20050308；丙硫氧嘧啶：上海复星朝晖药业有限公司，批号040708；vitd3注射液：上海通用药业股份有限公司，批号041108。no测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；et1、6ketopgf1α和txb2放射免疫试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所；其余试剂均为国产分析纯。

1.3  实验仪器

3k30型高速低温离心机：美国sigma公司；722型分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司；sn695b型放射免疫测定仪：上海核辐光电仪器设备有限公司。

1.4  方法

1.4.1  大鼠as模型的复制和实验分组

参考文献〔4〕方法建立大鼠as模型，于实验开始时给予模型组及各给药组大鼠腹腔注射vitd3注射液(总剂量60 万u/kg,分3 d给完)，同时给予高脂饲料(3％胆固醇，0.5％猪胆盐，0.2％丙硫氧嘧啶，5％白糖，10％猪油，81.3％基础饲料)。实验动物随机分为6组，每组8只：正常对照组，普通基础全价饲料；as模型组：高脂饲料；aefe高中低剂量组，高脂饲料＋aefe (420，140，70 mg·kg-1·d-1)；洛伐他汀组：高脂饲料＋洛伐他汀(4 mg·kg-1·d-1)。各给药组在造模2 w后开始灌胃给药(0.5 ml/100 g湿重)，共给药6 w。实验周期为8 w。

1.4.2  血浆no、et1、6ketopgf1α和txb2含量测定
大鼠抗凝血2 ml，4℃，3 000 r/min离心10 min，取血浆化学法测定no、放射免疫法测定et1、6ketopgf1α和txb2，均按试剂盒操作进行。

1.4.3  主动脉和冠状动脉形态学观察

取主动脉和心脏用10％甲醛固定，石蜡包埋切片，he染色光镜观察。

1.5  统计学方法

数据用x±s表示，结果用spss13.0统计软件进行t检验和方差分析处理。

2  结  果

2.1  aefe对血浆no和et1含量的影响

as模型组血浆no和et1浓度与正常对照组相比均明显降低(p＜0.01)；与as模型组相比，aefe低剂量组两指标改变无明显差异，aefe中、高剂量组和洛伐他汀组no和et1浓度明显升高(p＜0.01)。aefe中、高剂量组no水平高于洛伐他汀组，但无统计学意义(表1)。

2.2  aefe对血浆6ketopgf1α和txb2含量的影响

as模型组与正常对照组相比血浆6ketopgf1α浓度明显降低而txb2浓度显著升高(p＜0.01)；与as模型组相比，aefe低剂量组两指标改变无明显差异，aefe中、高剂量组和洛伐他汀组6ketopgf1α浓度明显升高(p＜0.01)，洛伐他汀组达到正常水平，但各组txb2浓度无差异(表1)。表1  各组大鼠血浆no、et1、6ketopgf1α和txb2浓度的变化(略)

2.3  aefe对主动脉和冠状动脉形态的影响

正常对照组大鼠主动脉和冠状动脉结构完整，层次清晰，内膜内皮细胞连续完整。as模型组主动脉内皮细胞呈连续性缺失，底层胶原纤维暴露，内皮下间隙增宽，内弹力板分离断裂；aefe低剂量组病理改变基本同as模型组；aefe中、高剂量组和洛伐他汀组动脉结构完整，层次清晰,内膜较光滑，偶见局部少量内皮细胞缺失。as模型组冠状动脉可见连续性内皮细胞缺失、数目不一的泡沫细胞和钙质沉着；aefe低剂量组冠脉改变基本同as模型组，而中、高剂量组和洛伐他汀组内皮基本完整，其下偶见泡沫细胞，管壁可见轻度增厚和少量钙质沉着，其病变程度明显好于as模型组,但三组间无显著差异(图1和图2)。

3  讨  论

血管内皮细胞损伤被认为是as最重要的始动环节，继发于它的内皮通透性、黏附性、血液凝固性改变及所释放的大量细胞因子及生长因子将导致as发生的一系列连锁反应〔5〕。血管内皮的正常功能是通过内皮分泌血管活性物质(如no，et1及pgi2等)来实现的，因此内皮损伤后首先表现为血管内皮细胞分泌功能的失调。有研究表明高血脂症可引起et1含量升高、no水平下降〔6，7〕；然而部分学者认为高血脂症对内皮细胞有毒性作用，损坏细胞的结构和功能，引起et1、no水平均降低〔8，9〕。孙金明等〔10〕研究高血脂症对内皮血管活性物质合成和释放的动态影响，结果显示高血脂症对etl基因表达及etl含量的影响呈波动性变化，高血脂症初中期et1基因的表达升高，随后呈下降趋势。pgi2和txa2维持平衡对预防as的发生，防止血栓形成有着重要的调节作用。由于两者的不稳定性，故目前均以测定6ketopgf1α和txb2作为判断其浓度的指标。在as发病过程中，oxldl增加，细胞过氧化脂质的升高，可以抑制血管壁pgi2合酶的活性，使pgi2合成减少，而血小板txa2生成增加。

在本实验中，高胆固醇饮食造模8 w后，as模型组大鼠血浆no、et1和6ketopgf1α含量较正常组明显降低，txb2浓度明显升高，同时血管内皮细胞有连续性缺失，血管结构紊乱，说明模型组血管内皮功能和结构受到明显的损伤,动脉粥样硬化发生；aefe中、高剂量和洛伐他汀能明显增加血浆no、et1和6ketopgf1α水平，使主动脉和冠状动脉内皮细胞损伤减轻、血管结构基本正常，但对txb2无影响，提示aefe具有维持no/et和txa2/pgi2平衡、保护血管内皮细胞结构和功能，防治as的作用。此时的no、et1和pgi2水平升高是内皮功能修复的一种表现，对txa2无影响提示aefe的作用靶点不在血小板。aefe升高no的作用较洛伐他汀明显，而对pgi2水平的影响不及洛伐他汀，说明两药对内皮细胞功能的修复影响环节不相同。aefe中、高剂量两组疗效无明显差异可能是aefe 140 mg·kg-1·d-1已接近效应，故增加剂量药物效应无显著增加。

杜仲提取物  绿原酸 5-98%  上禾生物

免责申明：

上禾生物是一家专业的标准化植物提取物生产企业。

上禾生物所生产的植物提取物系列产品，仅提供给相关生产企业，外贸企业，学校或研发机构，不面向个人客户销售。

平台所发布的新闻资讯只作为知识参考，仅供业内参考和交流，不对其精确性及完整性做出保证。因此任何信息所生之风险应自行承担，与上禾生物无关。如有侵权，请联系我们删除！