在免疫组织化学、免疫荧光及ELISA等免疫检测技术中,获得高信噪比的清晰结果至关重要。非特异性背景信号是困扰许多研究者的常见问题,其来源包括蛋白质的非特异性吸附、抗体间的非目标结合,以及组织细胞表面Fc受体的干扰。为了解决这一问题,使用封闭血清已成为实验流程中不可或缺的关键步骤。其中,正常山羊血清(货号:005-000-121)作为一种高效、特异的封闭试剂,在科研实验中广泛应用。
Jackson 总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特,距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学,蛋白质化学,微生物学,免疫学及产品开发实验研究。 Jackson产品仅用于研究,不用于诊断或治疗用途。作为美国各种二抗生产公司之一,Jackson在各国设有几十家代理。由于其产品效价 高、种类全、价格低廉,因而成为各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的优选。其产品主要包括:各种纯化的二抗、标记的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记)等。

一、产品特性与制备工艺
正常山羊血清,顾名思义,是来源于健康山羊的未免疫血清。本品为未标记的原态血清,经过一系列严谨的工艺处理,以确保其纯净度与稳定性。首先,血清经过脂质提取处理,这不仅能提高溶液的澄清度,减少潜在杂质,也有助于降低因脂质引起的非特异性背景。随后,产品被置于含有叠氮钠的磷酸盐缓冲液中进行透析,最终以冻干固体的形式提供。这种形式极大地方便了运输与长期储存,同时保持了血清中各种生物成分的天然活性。
二、核心功能:作为封闭试剂的应用原理
该血清的核心价值在于其作为封闭试剂的卓越性能。建议将重悬后的血清用PBS稀释至5%(v/v)的浓度,用于实验样本的封闭。
其发挥作用的机理主要基于以下几点:
1.占据非特异性结合位点:在包被了抗原的固相载体或组织切片上,存在着许多未被特异性抗原覆盖的区域。正常山羊血清中的大量无关蛋白质可以优先占据这些位点,从而阻止后续加入的检测抗体通过疏水作用或离子相互作用非特异性地吸附在这些区域,有效降低背景染色。
2.阻断Fc受体:许多细胞(如免疫细胞、内皮细胞)表面表达Fc受体,它们能够与抗体分子的Fc段结合。如果使用羊源性一抗或二抗,正常山羊血清中的天然免疫球蛋白可以封闭样本中可能存在的抗羊Fc受体,防止检测抗体通过Fc-Fc受体的相互作用非特异性地结合到细胞上。
3.中和无关干扰:血清中含有多种生物分子,可以中和样本中可能存在的其他非特异性干扰因素。
一个至关重要的建议是:为了达到最佳的封闭效果,应选择与标记抗体来源宿主相同的正常血清。例如,若实验中使用的是驴源性的标记二抗,那么最优的选择是正常驴血清进行封闭。这是因为同源血清能最有效地提供与标记抗体最相似的干扰蛋白谱,从而实现最精准的封闭。封闭通常作为一个独立的孵育步骤,在加入一抗之前进行。
三、使用、保存与操作指南
本品为冻干粉形态,应在2-8°C下干燥保存。使用前,需按照产品说明书加入指定体积的去离子水进行重悬。若溶液不够澄清,建议进行离心处理。重悬后的液体即为100%浓度的血清,在2-8°C下可稳定保存约6周。
对于更长期的保存,建议将重悬后的未稀释产品进行分装,并于-20°C或更低的温度下冷冻保存,并严格避免反复冻融,以维持血清中蛋白质的活性。
自重新水化之日起,产品的有效期为一年。若经性能测试验证,其封闭效果仍符合实验要求,则有效期可酌情延长。产品中含有0.05%的叠氮钠作为防腐剂,以抑制微生物生长。
四、工作浓度建议
对于封闭用途,标准操作是使用5%(v/v)的工作液。这可以通过将重悬后的100%血清进行1:20稀释(例如,50微升血清加入950微升PBS)轻松实现。当然,针对特定的实验体系(如某些背景较高的组织),可尝试在3%至10%的浓度范围内进行微调,以找到最优条件。
五、热门产品
AffiniPure小鼠抗人IgG Fcγ片段特异性抗体(已吸附牛、马、小鼠血清蛋白)
FITC标记AffiniPure山羊抗兔IgG(H+L)抗体
AffiniPure山羊抗小鼠IgG (Fcγ亚类3特异性)抗体
辣根过氧化物酶标记AffiniPure山羊抗小鼠IgG (Fcγ亚类2c特异性) 抗体
过氧化物酶偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,Fcγ 亚类 2b 特异性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
过氧化物酶偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,Fcγ 亚类 2a 特异性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
过氧化物酶偶联的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG,Fcγ 亚类 1 特异性(最小 X 胡,Bov,Rb Sr Prot)
AlexaFluor488标记山羊抗小鼠IgG(H+L)多克隆抗体
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)
AlexaFluor488标记驴抗小鼠IgG(H+L)多克隆抗体
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure 驴抗兔 IgG (H+L)(最小 X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,胡,Ms,大鼠,Shp Sr Prot)
Cy3 偶联 AffiniPure 驴抗兔 IgG(H+L)(最小 X Bov,Ck,Gt,GP,Sy Hms,Hrs,胡,Ms,大鼠,Shp Sr Prot)
Alexa Fluor 594 偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG (H+L)
Alexa Fluor 594 偶联 AffiniPure 山羊抗兔 IgG (H+L)
艾美捷科技是Jackson的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/products/005-000-121.shtml