在免疫荧光检测技术发展的漫长历程中，异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗体无疑扮演了奠基者的角色。作为最早被广泛应用的荧光染料之一，FITC以其成熟的工艺和稳定的性能，至今仍在许多实验室中发挥着作用。本文将详细介绍FITC标记驴抗兔IgG(H+L)多克隆抗体（货号：711-095-152）这一经典次级抗体的核心特性、应用方案及其在当代研究中的定位。
Jackson 总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特，距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学，蛋白质化学，微生物学，免疫学及产品开发实验研究。 Jackson产品仅用于研究，不用于诊断或治疗用途。作为美国各种二抗生产公司之一，Jackson在各国设有几十家代理。由于其产品效价 高、种类全、价格低廉，因而成为各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的优选选。其产品主要包括：各种纯化的二抗、标记的二抗（AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记）等。
一、抗体核心特性：高特异性与广泛反应性
本品为源自驴宿主的多克隆抗体，其靶标为兔源性免疫球蛋白G。抗体形式为全分子IgG，意味着其保留了完整的抗体结构——包含一个Fc片段和两个通过二硫键连接的抗原结合Fab片段，形成分子量约为160kDa的二价结构。这种完整结构使其具备更高的抗原结合亲合力，适用于绝大多数免疫检测实验，并且因其制备工艺成熟而具有显著的成本优势。
其特异性被定义为IgG(H+L)。这表明它不仅能识别兔IgG分子的重链，也能与其轻链结合。由于同一物种内不同类别免疫球蛋白（如IgM、IgA等）共享相同或相似的轻链，因此该抗体能够与兔的各种IgG亚类以及其他兔免疫球蛋白发生反应，确保了检测的全面性。
本品格外突出的优势之一在于其经过严格处理的最小交叉反应性。通过ELISA和/或固相吸附测试，已证实该抗体与牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、大鼠和绵羊的血清蛋白发生交叉反应的风险极低。这一特性对于在复杂组织样本（如包含多种细胞或血清成分的样本）中进行实验的研究者至关重要，它能有效避免由非特异性结合导致的高背景，从而获得更清晰、更可靠的特异性信号。当然，产品说明也提示，它仍有可能与未列出的其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。
二、制备工艺与稳定保存方案
该抗体通过免疫亲和层析技术进行纯化，从抗血清中特异性分离出目标抗体，确保了产品的高纯度与高活性。产品以冻干粉形式提供，应在2-8°C下干燥保存。
使用前，需按照产品说明书加入指定体积的去离子水进行重悬。若溶液不够澄清，建议进行离心处理。重悬后的液体在2-8°C下可作为原液稳定保存约6周。
对于长期保存，推荐以下两种策略：
1.分装深冻：将重悬后的抗体分装至小管中，于-70°C或更低的温度下冷冻保存，并严格避免反复冻融。
2.甘油保存：在抗体原液中加入等体积的甘油（最终浓度为50%），然后以液体形态储存于-20°C。
自重新水化之日起，产品的有效期为一年。若经性能测试验证合格，此有效期可酌情延长。产品的基础缓冲体系为pH7.6的0.01M磷酸钠和0.25MNaCl，并含有15mg/ml的无IgG、无蛋白酶牛血清白蛋白作为稳定剂，以及0.05%的叠氮钠作为防腐剂。
三、荧光标记：FITC的性能分析与应用考量
本品所使用的标记物是异硫氰酸荧光素（FITC）。其最大激发波长和最大发射波长分别为492nm和520nm，是典型的绿色荧光信号。
作为历史最悠久的荧光标记物之一，FITC的主要优势在于其技术成熟、成本相对较低，并且拥有大量的历史数据可供参考。然而，与新一代的绿色荧光染料（如AlexaFluor®488）相比，FITC也存在一些固有的局限性：
亮度较低：在相同条件下，FITC的荧光强度通常不及AlexaFluor®488。
光稳定性差：FITC在光照下容易发生光漂白，导致荧光信号迅速衰减，这给拍照和观察，特别是需要长时间曝光的实验带来了挑战。为了缓解此问题，强烈建议在封片时使用含有抗荧光淬灭剂的封片剂。
因此，在产品说明中，制造商明确建议，对于许多原本计划使用FITC的应用，AlexaFluor®488是更优的选择，因为它更亮、更耐光漂白，且对pH变化的敏感性更低。
四、使用建议与实验优化
产品给出的建议工作稀释度范围是1:50至1:200。这个起始范围相较于其他一些荧光标记的抗体要更浓一些，可能与FITC本身的荧光效率有关。然而，必须明确指出，这仅是一个推荐的起始点，最佳的稀释倍数必须通过使用者自身的实验体系进行严谨的经验性确定。
影响最终工作浓度的因素繁多，主要包括：
抗原密度：目标蛋白在样本中的表达水平。
样本类型与固定方式：不同的样本处理方式会影响抗体的渗透性与结合效率。
信号检测设备的灵敏度。469篇文献中被引用
五、热门产品
荧光素 （FITC） 偶联的 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
荧光素 （FITC） 偶联 AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG （H+L）
荧光素 （FITC） 偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
Cy3 偶联 AffiniPure 驴抗山羊 IgG （H+L）
Cy3 偶联 AffiniPure 驴抗兔 IgG（H+L）（最小 X Bov，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，大鼠，Shp Sr Prot）
Cy3 偶联 AffiniPure 驴抗小鼠抗小鼠 IgG （H+L） （min x bov，ck，gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Rb，Shp Sr Prot）
Cy3 偶联 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
Cy3 偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
Alexa Fluor 594 偶联 IgG 组分单克隆小鼠抗地高辛
AffiniPure 山羊抗小鼠 IgM，μ链特异性
AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG （H+L）（最小 X 胡，Bov，小时，Ms，Rb Sr Prot）
AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG + IgM （H+L）
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure 驴抗绵羊 IgG （H+L）
过氧化物酶偶联 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
R-藻红蛋白偶联 AffiniPure 山羊抗人 IgG，Fcγ 片段特异性（min x bov，hrs，Ms Sr Prot）
Cy3 偶联 AffiniPure 驴抗兔 IgG（H+L）（最小 X Bov，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，大鼠，Shp Sr Prot）
过氧化物酶偶联的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
过氧化物酶偶联 IgG 组分单克隆小鼠抗兔 IgG，轻链特异性（min x bov，gt，arm hms，hrs，胡，ms，大鼠，shp ig）
过氧化物酶偶联的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG （H+L）
过氧化物酶偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG，轻链* 特异性（最小 x Bov，Gt，Hrs，胡，Rb，大鼠，shp ig）
Alexa Fluor 647 偶联 AffiniPure 驴抗大鼠 IgG （H+L）（最小 X BoV，Ck，Gt，GP，Sy Hms，Hrs，胡，Ms，Rb，Shp Sr Prot）
AffiniPure 山羊抗人 IgG + IgM （H+L）
过氧化物酶偶联的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG，Fcγ 片段特异性
R-藻红蛋白偶联 AffiniPure 山羊抗人 IgG，Fcγ 片段特异性（min x bov，hrs，Ms Sr Prot）
12nm 胶体金-AffiniPure 山羊抗兔 IgG（H+L）（min x 胡，Ms，大鼠 Sr Prot）（EM 级）
过氧化物酶偶联 IgG 组分单克隆小鼠抗兔 IgG，轻链特异性（min x bov，gt，arm hms，hrs，胡，ms，大鼠，shp ig）
Alexa Fluor 647 偶联 AffiniPure 山羊抗兔 IgG （H+L）
R-藻红蛋白偶联 AffiniPure F（ab'）2 片段山羊抗人 IgG，F（ab'）2 片段特异性（min x Bov，Hrs，Ms Sr Prot）
Alexa Fluor 488 偶联 AffiniPure F（ab'）2 片段山羊抗人 IgG，F（ab'）2 片段特异性（最小 X Bov，小时，Ms Sr Prot）
Alexa Fluor 647 偶联的 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG（亚类 1 + 2a + 2b + 3），Fcγ片段特异性（最小 X 胡，Bov，Rb Sr Prot）
R-藻红蛋白偶联 AffiniPure 山羊抗小鼠 IgG（亚类 1+2a+2b+3），Fcγ 片段特异性（min x 胡，Bov，Rb Sr Prot）
AffiniPure 山羊抗人 IgG，F（ab'）2 片段特异性（最小 X Bov，小时，Ms Sr Prot）
艾美捷科技是Jackson的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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