基于已知对泛素具有亲和力的蛋白质结构域，串联泛素结合实体（Tandem Ubiquitin Binding Entities，TUBEs）已被开发用于分离和鉴定泛素化蛋白。TUBEs对多泛素化结构的亲和力比单个泛素结合相关结构域（UBA）高出多达1000倍。此外，TUBEs对多泛素化蛋白具有保护作用，使其即使在相对低丰度的情况下也能被检测到。这些特性有效地“捕获”了处于多泛素化状态的蛋白质。UM502M是通过涂覆高容量磁性珠子设计而成的，能够高效富集多泛素化蛋白，同时最大限度地减少与组织和细胞裂解物中蛋白质的非特异性结合。

艾美捷TUBE 2（高容量磁珠）：

货号：UM-0502M-1000  

亲和标签：不适用  

纯度：（偶联前）通过SDS-PAGE分析，纯度>95%  

分子量：不适用  

数量：1 mL磁性珠子  

物理状态：液体  

储存：+4°C。避免在更低温度下储存  

应用：  

从细胞系、组织和器官中捕获多泛素化蛋白  

保护多泛素化蛋白免受去泛素化和蛋白酶体降解  

基于磁珠的ELISA用于研究泛素化蛋白质组  

无标记质谱泛素化蛋白质组分析  

TUBE 2（高容量磁珠）图片：

图1. 使用UM502M富集总泛素化蛋白质组。  

将100 uL UM502M磁性珠子加入到300 ug的HeLa细胞裂解物中，这些细胞经以下处理：DMSO和1 uM MG-132处理4小时。数据显示了使用UM502M在4°C下通过端到端旋转器对DMSO和MG-132处理的裂解物进行过夜富集的结果。对于蛋白酶体抑制剂（MG-132）处理的样本，观察到特征性的增强泛素化条带，表明对总多泛素化蛋白质组的高效捕获。富集后的珠子在10% SDS-PAGE和Western blot分析之前，用30 uL 1X Laemmli样品缓冲液重悬，使用抗泛素抗体（VU101）进行检测。

文献参考：

1. Hjerpe, R, Aillet, F, Lopitz-Otsoa, F, Lang, V, England, P, and Rodriguez, MS., Efficient protection and isolation of ubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities. EMBO Rep. 10,1250-1258 (2009).

2. Stormo, Adrienne ED, Farbod Shavarebi, Molly FitzGibbon, Elizabeth M. Earley, Hannah Ahrendt, Lotus S. Lum, Erik Verschueren et al (2022) "The E3 ligase TRIM1 ubiquitinates LRRK2 and controls its localization, degradation, and toxicity." Journal of Cell Biology 221, no. 4.

3. Sarbanes, Stephanie L., Vincent A. Blomen, Eric Lam, Søren Heissel, Joseph M. Luna, Thijn R. Brummelkamp, Erik Falck-Pedersen, H-Heinrich Hoffmann, and Charles M. Rice. (2021) "E3 ubiquitin ligase Mindbomb 1 facilitates nuclear delivery of adenovirus genomes." Proceedings of the National Academy of Sciences 118, no. 1: e2015794118

https://www.amyjet.com/products/LSS-UM-0502M-1000.shtml