肌酐酶主打

　　货号：HH0106-01，HH0106-02，HH0106-03，HH0106-04；

　　技术指标

　　外观：白色或微黄色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥150U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.1%；蛋白酶：≤0.001%；肌酸酶：≤0.001%；ATP酶：≤0.001%。

　　酶学性质

　　来源：微生物；分类：EC3.5.2.10；分子量：29kDa(SDS-PAGE)；等电点：5.3；Km值：5.0×10-2M(Creatinine)，8.0×10-2M(Creatine)；抑制剂：Hg2+，Cu2+，Fe3+；最适pH：7.0-8.0；最适温度：65℃；pH稳定性pH：5.5-10.0(25℃,16h)；热稳定性：65℃以下稳定(pH8.0,30min)；稳定性：-20℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：糖类以及BSA。

　　用途：水解肌酐，用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

　　活性测定方法

　　原理：Creatinine+H2O-Creatinineamidohydrolase-Creatine

　　酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化反应生成1μmol肌酸所需的酶量。

　　试剂准备

　　试剂I：0.3M磷酸钾缓冲液，pH6.5。

　　试剂II：0.1M肌酐溶液（1.13g肌酐溶于100mLUP水中）。

　　试剂III：4%Na2CO3溶液（4.0gNa2CO3溶于100mLUP水中）。

　　试剂IV：2%α-萘酚溶液（2.0gα-萘酚溶于100mL99.5%乙醇中）。

　　试剂V：1.2gNaOH和3.2gNa2CO3溶于双蒸水中，定容至100mL。

　　试剂VI：0.05%二乙酰溶液（0.05mL二乙酰加水定容至100mL）。

　　酶稀释液：5mMTris-HClpH8.0

　　操作步骤

　　1.在5mL离心管中加入0.1mL试剂I，0.8mL试剂II。

　　2.37℃水浴5min。

　　3.加入0.1mL待测样品，37℃孵育10min。

　　4.加入2.0mL试剂III终止反应，取出置于冰上。

　　5.在新的5mL离心管中按顺序加入如下试剂：第4步的溶液：80μL；双蒸水：720μL；试剂IV：400μL；试剂V：400μL；试剂VI：400μL。

　　6.25℃静置1h后，加入2mL双蒸水稀释。

　　7.用分光光度计在525nm检测吸光度。

　　*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb