货号:HH0201-01;HH0201-02;HH0201-03;HH0201-04
技术指标
外观:白色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥6U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.03%;肌酐酶:≤0.01%;肌氨酸氧化酶:≤0.01%NADH氧化酶:≤0.01%。
酶学性质
来源:微生物;分类:EC3.5.3.3;分子量:48kDa(SDS-PAGE);等电点:4.6;Km值:1.7×10-2M(Creatine);抑制剂:Ag+,Cu2+,Hg2+;最适:pH7.5;最适温度:45-50℃;pH稳定性:4.5-10.0(25℃,16h);热稳定性:50℃以下稳定(pH7.5,30min);稳定性:-20℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:EDTA及糖类物质。
用途:水解肌酸,用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。
尿素(Urea)和DAB(ρ-dimethylaminobenzaldenhyde)反应形成的黄色染料的量可通过分光光度计在435nm检测。
酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化反应生成1μmol肌酸完全转化为肌氨酸所需的酶量。
试剂准备
试剂I:0.1M肌酸溶液。
试剂II:将2.0gDAB溶解在100mL二甲亚砜中,并加入15mL浓盐酸。
酶稀释液:50mMPBS,pH7.5,样品用酶稀释液将酶稀释至2.0-3.0U/mL。
操作步骤
1.取1mL试剂I于5mLEP管中,37℃预热5min。
2.加入0.1mL酶液,混匀。
3.37℃水浴反应10min后,加入2.0mL试剂II终止反应,并在25℃放置20min。
4.使用紫外分光光度计,测定反应液在435nm处吸光度值。
5.酶稀释液代替酶液作为空白对照。
关键字: 肌酸脒基水解酶;肌酸酶;肌酸脒基水解酶试剂;肌酸脒基水解酶(CR-T);
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