γ-谷氨酸激酶(γ-GK)试剂盒微板法/48样
产品简介:
γ -谷氨酸激酶(γ -GK, EC 2.7.2.11)是脯氨酸生物合成途径中的关键酶之一。催化由谷氨酸生成脯氨酸途径的第一步反应。
本试剂盒利用γ-GK 催化谷氨酸磷酸化,进一步与转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与 Fe3+形成 Hydroxamate-Fe3+复合物 ,通过检测该复合物在 535 nm 波长处的OD 值,进而得出γ-GK酶 活 力 大 小 。 该 酶 催 化 的 反 应 方 程 式 :ATP+L-glutamate=ADP+L-glutamate
5-phosphate。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4°℃保存 |
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试剂一 | 粉剂5mg×1瓶 | 4°℃保存 |
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试剂二 | 液体mL×1瓶 | 4°℃保存 | 临用前甩几下,使粉体落到底部,再加入 6mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂三 | 液体5mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | 粉体 mg×1 支 | 4℃保存 | 临用前甩几下,使粉体落到底部,再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂五 | 液体 10mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
γ-谷氨酸激酶(γ-GK)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆, 12000rpm ,4℃离心 10min,取上清液
待用。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例进行提取。
②细菌/真菌样本:
先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取500万细菌/真菌加入1mL 提取液;
冰浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率20%或200W, 超 声 3s,间 隔 1 0s,重 复 3 0 次 ) ; 12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104个):提取液体积(mL) 为500~1000:1的比例进行提取。
③液体样本:澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清液检测。
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