柠檬酸合酶(CS)测定试剂盒/分光光度法25管/12样
测定意义:
CS( EC 2.3.3.1 )廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸迴圈第一個限速酶,是三羧酸迴圈主要調控位點之一。
测定原理:
CS 催化乙醯 CoA 和草醯乙酸產生檸檬醯輔酶 A ,進一步水解產生檸檬酸 ;該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB ,在 412nm 處有特徵吸光值。
自备仪器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水。
测定步骤:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 412nm ,蒸餾水調零。
2、樣本測定
( 1 )在試劑五中加入 1.2mL 無水乙醇和 26mL 試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)孵育 5min ;用不完的試劑分裝後-20℃保存,禁止反復凍融;
( 2 )測定管:在 EP 管中加入 40μL 樣本、880 μL 試劑五和 40μL 試劑六,混勻,37℃反應 15min 後立即測定吸光值 A1。
( 3 )對照管:在 EP 管中加入 40μL 樣本、880 μL 試劑四和 40μL 試劑六,混勻,37℃反應 15min 後立即測定吸光值 A2。
( 4 )計算ΔA=A1-A2 ,每個測定管設一個對照管。
注 意:
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
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