丙酮酸(PA)含量试剂盒(酶法)微板法/96样产品简介:
丙酮酸在各种生化途径中起着重要作用,可在糖异生过程中转化为碳水化合物,或通过乙酰CoA 转化为脂肪酸。乳酸脱氢酶(LDH)可使丙酮酸转化为乳酸,同时使 NADH 氧化,利用 NADH 在 340nm 的下降量来计算丙酮酸含量。所需的仪器和用品:酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体30mL×1瓶
试剂二
粉剂mg×1支
临用前加 1.1mL 蒸馏水溶解;溶解后-20℃保存 2 周。
试剂三
-20℃保存
临用前加 1.1mL 蒸馏水溶解,溶解后仍-20℃保存。
丙酮酸(PA)含量测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 称取约 0.1g 组织,水分充足的样本可取约 0.5g,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆, 12000rpm,室温离心 10min,取上清液待测。(若组织样本蛋白含量很高,可进行脱蛋白处理)
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 5~10: 1 的比例进行提取② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s ,间隔 10s,重复 30 次), 12000rpm,室温离心 10min,取上清液待测。[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1的比例进行提取。
③ 液体样品:近似中性的澄清液体样本可直接检测;若为酸性样本则需先用 NaOH(2M)调 PH 值约 7.4,然后室温静置 30min,取澄清液体直接检测。
上海酶联生物科技有限公司
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