氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理：
利用2-VP法测GSSG含量。
组成：
产品名称 | GSH004-100T/96S | Storage |
试剂一：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 600μl | 4℃ |
试剂三：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂四：液体 | 2.5ml | 4℃ |
试剂五：液体 | 15μl | -20℃ |
试剂六：粉剂 | 1瓶 | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂五： 液体15μL×1瓶，-20℃保存。临用前加入0.3ml试剂三稀释，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入20 ml试剂三溶解，现配现用。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSSG含量测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。
2. 试剂六置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3.取1 ml EP管，加入100μ l上清液，5 μ l试剂二，盖紧后混匀，得混合液，置于37℃水浴30min；取21μ l混合液于96孔板，然后依次加入20 μ l试剂四、2 μ l试剂五和140 μ l试剂六，迅速混匀后，测定30 s和150 s光吸收A1和A2，计算ΔA=A2-A1。
GSSG含量计算公式：
使用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y=0.0138x-0.0011；x为标准品浓度（nmol/ml），y为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样×Cpr)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG（nmol /g 鲜重）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×W)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG（nmol/ml）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V样÷V样
=72.46×(ΔA+0.0011)
V样：反应中加入样本体积，20μL；V样总：加入提取液体积， 1ml；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白浓度（mg/ml）
注意事项：
提取过程中去掉蛋白质，所以提取液不能用于测定蛋白含量。
临用前配制的试剂配好后4℃保存，2天内使用完毕。
最低检出限为0.1μmol/L。
反应温度严格来说，为保证重复性，应在25℃下进行反应。
反应时间需精确控制，否则会影响反应速率计算，产生较大误差。
样品中的GSSG浓度尽可能低一些，否则反应速率太大，没法控制，所以稀释倍数要尽量大些。
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