氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量测定试剂盒/微量法/96S
测定意义:
GSH/GSSG 是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内 GSH 和GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理:
利用 2-VP 法测GSSG 含量。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
GSSG 含量测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min ,调节波长到 412nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中保温 30min。
3. 取 1 mL EP 管,加入 100μ L 上清液,5 μ L 试剂二,盖紧后混匀,得混合液,置于 37℃水浴 30min;取 21μ L 混合液于 96 孔板,然后依次加入 20 μ L 试剂四、2 μ L 试剂五和 140 μ L 试剂六,迅速混匀后,测定 30 s和 150 s 光吸收 A1 和 A2,计算ΔA=A2-A1。
注 意:
1. 提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2. 临用前配制的试剂配好后 4℃保存,2 天内使用完毕。
3. 最低检出限为 0.1 μmol/L。
4. 反应温度严格来说,为保证重复性,应在 25℃下进行反应。
5. 反应时间需精确控制,否则会影响反应速率计算,产生较大误差。
6. 样品中的 GSSG 浓度尽可能低一些,否则反应速率太大,没法控制,所以稀释倍数要尽量大些。。
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