乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理：
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。
组成：
产品名称 | KC022-50T/24S | Storage |
提取液：液体 | 55ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 5ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 12ml | 4℃ |
试剂三：粉剂 | 1支 | -20℃避光 |
试剂四：粉剂 | 1瓶 | 4℃避光 |
试剂五：粉剂 | 1支 | 4℃避光 |
标准品：液体 | 1ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入1.5ml蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加15ml蒸馏水充分溶解。
显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（ml)：0.3（ml)：3（ml)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5个棕色空瓶）
自备仪器和用品：
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。
样本处理：
组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。
细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取上清测定。
血清：直接测定。
测定操作：
| 样品对照管 | 样品测定管 | 标准对照管 | 标准测定管 |
样品（μl） | 50 | 50 |
|
|
标准品（μl） |
|
| 50 | 50 |
H2O（μl） | 225 | 450 | 225 | 450 |
试剂一（μl） | 225 |
| 225 |
|
试剂二（μl） | 200 | 200 | 200 | 200 |
显色液（μl） | 300 | 300 | 300 | 300 |
充分混匀，于37℃反应30min，于1ml玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定530nm处吸光值，分别记为A1，A2，A3，A4，△A样=A2-A1；△A标= A4-A3 |
注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管
计算公式：
1. 按照蛋白含量计算
LA含量（μmol/mg prot）=△A样÷△A标×C标÷ Cpr
=2×△A样÷△A标÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
LA含量（μmol/g 鲜重）=△A样÷△A标×C标÷ W
=2×△A样÷△A标÷ W
按照细胞数量计算
LA含量（μmol/104 cell）=△A样÷△A标×C标÷ 细胞数量
=2×△A样÷△A标÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
LA含量（μmol/ml）=△A样÷△A标×C标
=2×△A样÷△A标
C标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml
注意事项：
若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
最低检出限为1.8μmol/L。
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