乳酸含量（LA）测试盒 新品

乳酸含量（LA）测试盒

测定意义与原理

测定意义

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢和有氧代谢的重要指标。其含量的异常升高与多种疾病如糖尿病和酸毒症等疾病有密切关系。在剧烈运动和肌肉抽搐时，血液乳酸浓度会显著升高。在脓毒血症、呼吸衰竭、糖尿病和肾衰竭等疾病条件下，血液乳酸浓度也会显著升高。

测定原理

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。反应式如下： 乳酸+NAD+→LDH丙酮酸+NADH+H+乳酸+NAD+LDH丙酮酸+NADH+H+ NADH+PMS→NAD++PMSH2NADH+PMS→NAD++PMSH2 PMSH2+INT→PMS+INT还原态PMSH2+INT→PMS+INT还原态

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

提取液 液体50mL×1瓶 用于提取样本中的乳酸

试剂一 液体6mL×1瓶 含缓冲液，用于提供适宜的反应pH环境

试剂二 液体0.06mL×1支 含酶贮备液，反应辅助因子

试剂三 粉剂×1支 含稳定剂，用于稳定反应体系

试剂四 粉剂×1瓶 含显色剂，用于检测反应产物

试剂五 液体1mL×1支 含标准品（10mmol/L），用于建立标准曲线

自备仪器与试剂

必备仪器

比色法：可见分光光度计/酶标仪（530nm检测通道）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

动植物组织样本取样：准确称取0.1g组织，用生理盐水洗净表面杂质，用滤纸吸干匀浆：加入1mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆离心：8000g，4℃离心10min，弃沉淀，保留上清液检测：上清液用于乳酸含量测定

细胞样本收集：收集500万细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/血浆样本

血清/血浆样本可直接检测；若浓度过高，用提取液稀释10-20倍

测定操作步骤

比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长到530nm，用蒸馏水调零试剂配制：

显色液：临用前根据用量按照提取液(V):试剂三(V):试剂四(V):试剂五(m)=1(mL):0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混匀。注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有5个棕色空瓶标准曲线绘制：

将标准品稀释成0、1、2、3、4、5mmol/L系列浓度

取100μL标准溶液于比色管中，加入900μL显色液，混匀，37℃水浴30min

测定530nm吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取100μL样本溶液于比色管中，加入900μL显色液，混匀，37℃水浴30min

测定530nm吸光度，根据标准曲线计算样本中乳酸含量

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

mmol/g 鲜重：每克鲜重样本中乳酸的含量

mmol/L：每升样本中乳酸的含量

比色法计算公式

乳酸含量(mmol/g鲜重)=C×V总W×V样×1000乳酸含量(mmol/g鲜重)=W×V样C×V总×1000

C：根据标准曲线计算出的样本中乳酸浓度（mmol/L）

V总：样本提取液总体积（mL）

W：样本质量（g）

V样：测定时取用样本体积（mL）

ELISA法计算公式

乳酸含量(mmol/L)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数乳酸含量(mmol/L)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 比色法 ELISA法

线性范围 0~5mmol/L 0~10mmol/L

最低检测限 ≤0.1mmol/L ≤0.1mmol/L

回收率 90%~110% 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免乳酸降解；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活

液体样本需避免溶血和细菌污染

试剂使用：

试剂四需临用前配制，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃

加入试剂后需充分混匀，确保反应完全

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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