绵羊痘病毒(SPPV)检测试剂盒(荧光PCR法)
一、技术原理
荧光定量PCR(qPCR)
靶向SPPV保守基因(如P32衣壳蛋白基因或DNA聚合酶基因),通过特异性引物和TaqMan探针(如FAM标记)实时扩增病毒DNA,荧光信号强度与病毒载量成正比。
灵敏度:可检测低至5-10拷贝/μL的病毒核酸。
多重检测设计
部分试剂盒含内参基因(如绵羊GAPDH),同步验证样本质量,避免假阴性。
产品名称 | 绵羊痘病毒(SPPV)检测试剂盒(荧光PCR法) | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1138 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
二、试剂盒组成
组分 作用说明 储存条件
核酸提取试剂 裂解液、蛋白酶K等 室温或4℃
qPCR预混液 含热启动Taq酶、dNTPs、Mg2? -20℃避光
SPPV引物探针混合液 特异性扩增靶序列 -20℃避光
阳性/阴性对照 验证实验有效性 -20℃(分装)
三、检测流程
样本采集
推荐样本:病变皮肤组织、痂皮、鼻拭子或全血(EDTA抗凝)。
运输要求:4℃保存(≤72小时)或-80℃长期储存,避免反复冻融。
核酸提取
采用试剂盒配套柱提法或磁珠法,提取DNA后需测定浓度(A260/A280≈1.8-2.0)。
qPCR反应
程序:95℃ 2min → (95℃ 15s → 60℃ 30s) ×45循环,于退火阶段采集荧光信号。
结果分析
阳性:Ct值≤35且扩增曲线呈指数增长;
可疑:35<Ct值<40,建议复测或测序确认;
阴性:无扩增曲线或Ct值≥40。
四、应用场景
疫情监测:养殖场或边境检疫中快速筛查SPPV感染。
疫苗评价:评估疫苗免疫后病毒残留情况。
科研用途:病毒分子流行病学研究或宿主免疫机制分析。
五、关键注意事项
防污染措施
严格分区操作(样本处理区、PCR准备区、扩增区),使用带滤芯吸头。
质量控制
每批次检测需包含阴性对照(无模板)和阳性对照(已知浓度SPPV DNA)。
局限性
无法区分野毒株与疫苗株(需结合测序);冻融样本可能降低检测灵敏度。
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关键字: 绵羊痘病毒;检测试剂盒;荧光PCR法;
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