商品属性：
产品名称 | 解脲支原体(UU)检测试剂盒(荧光PCR法) | 检测方法 | 荧光PCR法 |
货号 | XG-P1265 | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
规格 | 50T | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测意义： 解脲支原体是一种常见的病原体，主要引起非淋菌性尿道炎，并与前列腺炎、附睾炎、阴道炎、宫颈炎等疾病相关，可能导致不孕不育、流产及新生儿感染。
该试剂盒适用于临床辅助诊断、流行病学调查和疗效评估。 方法学： 实时荧光定量PCR技术，通常采用TaqMan探针法或SYBR Green染料法，以前者更为特异和常用。
二、 检测原理（核心技术）
本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术。其核心在于对PCR扩增过程进行实时监测，通过荧光信号的变化来判定样本中是否含有UU的特异性DNA片段。
以TaqMan探针法为例：
核酸提取： 从临床样本中提取总核酸（包括可能存在的UU DNA）。
PCR扩增与荧光信号产生：
特异性引物： 针对UU基因组中高度保守的特异性序列（如尿素酶基因或MB抗原基因）设计一对引物。
特异性荧光探针： 设计一条与靶序列互补的寡核苷酸探针，其5‘端标记一个报告基团，3’端标记一个淬灭基团。当探针完整时，淬灭基团会抑制报告基团发光。
工作流程（每个循环）：
变性： 高温（~95℃）使DNA双链解离为单链。
退火： 降温（~55-60℃）使引物和探针同时与模板DNA结合。
延伸： Taq DNA聚合酶沿模板合成新链。当合成遇到探针时，其5‘→3’外切核酸酶活性会将探针水解切断。
荧光释放： 报告基团与淬灭基团分离，从而发出荧光。每扩增一条DNA链，就释放一个荧光信号。荧光强度与PCR产物的积累量成正比。
实时检测： 荧光PCR仪在每个循环结束后检测荧光强度。随着扩增循环进行，荧光信号指数级增长，形成一条“S”型扩增曲线。
阳性判定： 当荧光信号强度超过预先设定的阈值线时，所对应的循环数称为Ct值。Ct值与起始模板中UU DNA的含量成反比。
三、 试剂盒组成（示例）
UU PCR反应液： 含有缓冲液、dNTPs、Mg2?等。
Taq酶混合物： 包含热启动Taq DNA聚合酶。
UU荧光探针引物混合液： 含有针对UU的特异性引物和探针（报告基团通常为FAM或VIC）。
阳性对照： 含有UU目标基因片段的质粒DNA。
阴性对照： 无核酸酶水。
说明书
【用户需自备】
核酸DNA提取试剂盒
无核酸酶水、离心管、带滤芯吸头
实时荧光定量PCR仪
微量离心机、移液器、生物安全柜/超净工作台
四、 操作流程
总流程：样本采集与处理 → DNA提取 → 配制反应体系 → 上机运行 → 结果分析
样本采集与处理：
尿道/宫颈拭子： 将采集后的拭子浸入无菌生理盐水或样本保存液中，充分振荡后弃去拭子，取液体进行提取。
尿液： 取清晨首次尿或间隔4小时以上的中段尿，离心取沉淀进行提取。
DNA提取：
使用商品化的基因组DNA提取试剂盒，严格按照说明书操作。最终将DNA溶于适量无核酸酶水中。
关键点： 严格无菌操作，防止交叉污染；尿液样本需新鲜或妥善保存于-20℃。
反应体系配制（以25μL体系为例）：
在无菌PCR管中，按以下顺序加入：
PCR反应液 12.5 μL
探针引物混合液 2.5 μL
提取的DNA模板 5-10 μL
用无核酸酶水补足至 25 μL。
盖紧管盖，短暂离心混匀。
PCR扩增程序：
将反应管放入荧光PCR仪，设置以下程序：
阶段1：预变性 95℃ for 2-5分钟。
阶段2：循环扩增（40-45个循环）
95℃ for 15秒 （变性）
60℃ for 30-60秒 （退火/延伸，在此阶段采集荧光信号）
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关键字： 解脲支原体;检测试剂盒;荧光PCR法;
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