过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(钼酸铵比色法)/微量法/48样
测定意义:
CAT(EC 1. 11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理:
过氧化氢能氧化 MoO42-成 MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到稳定的黄色复合物(H2MoO4 ·XH2O)n 在 405nm 处有强烈吸收峰,其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体系剩余过氧化氢在 405nm 的吸光值即可反映 CAT 的催化活性。
自备仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水测定步骤:
在 EP 管中加入下列试剂
试剂名称 ( μL)
测定管
对照管
样本
50
试剂一
30
试剂二
100
混匀,25℃准确反应 10 min
试剂三
265
混匀
混匀,取 200 μL 于 96 孔板立即测定 A 测定和 A 对照, A=A 对照-A 测定。每个测定管需设一个对照管。
注 意:
1、预实验若发现酶活性过高(A 测定<0. 1),可用提取液适当稀释样品后测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数;
2、若 A 对照<A 测定,一方面可能是酶活性过低,可将反应时间 10 延长到 30min,另一方面可能样本中杂质干扰严重,可将样本稀释 5 倍左右后测定,并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。
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