植物可溶性糖含量测定试剂盒/比色法/48样
测定原理:
糖(sugar)在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糖醛或羟甲基糖醛,生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比, 故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质,在可见光区的吸收峰为 630nm ,可在此波长下进行比色。本试剂盒采用的蒽酮比色法,可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定,具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。试剂组成与配制:
试剂一:粉剂× 1 瓶,4℃避光保存;
试剂二:液体×1 瓶,4℃密封保存;
底物液的配制:在试剂一粉剂中加入 5ml 试剂二,充分溶解,如较难溶解,可微热搅拌或者摇晃,溶解后待用;配好的底物液 4℃避光可保存一周。
试剂三:1mg/ml 标准品贮备液 0.3ml ×1 支,4℃保存;标准品稀释液 10ml ×1 支,4℃保存;100μg/ml标准品应用液的配制:取 1mg/ml 标准品贮备液 0.2ml ,加入 1.8ml 的标准品稀释液中(即标准品贮备液:标准品稀释液=1:9),混匀,制备成 100μg/ml 的标准品应用液。
试剂四:浓硫酸(60ml-100ml)(分析纯)自 备。可溶性糖的提取:
可溶性糖提取详见试剂盒内说明书。使用蛋白浓度校正测定结果时可用总蛋白定量测试盒(考马斯亮蓝法)或者总蛋白定量测试盒(BCA 法)进行蛋白浓度的测定。
操作表:
试剂
空白管
标准管
测定管
蒸馏水(μl)
200
100μg/ml 标准品应用液(μl)
样本上清液(μl)
底物液(μl)
100
浓硫酸(μl)
1000
充分混匀,置沸水浴(95~100℃) 中反应 10min(水浴时需盖紧管盖或封口,管盖或封口膜 上扎一小孔,以减少水分散失及平衡气压),取出流水冷却后,波长 620nm ,1cm 光径 4mm 内径(或 0.5cm 光径)比色皿,蒸馏水调零,测定各管吸光度值(ΔA=A 测定管-A 空白管)。
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