多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理：
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。
组成：
产品名称 | SR012-100T/48S | Storage |
提取液：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 20ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 5ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
自备仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）或果汁样本的处理：
按照血清（浆）或果汁体积（ml）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议取0.1ml血清（浆）或果汁加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。
样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）
试剂名称（μl） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 |
|
煮沸的样本 |
| 50 |
试剂一 | 200 | 200 |
试剂二 | 50 |
|
蒸馏水 |
| 50 |
37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，95℃水浴5min，冷却至室温，10000g，25℃离心10min，收集上清，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中，525nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。
注意：煮沸样本的操作：取300μl离心上清于EP管中，进行5min 95℃水浴处理；每个测定管需要设一个对照管，可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃水浴处理。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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