NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)测定试剂盒/微量法/96样
测定意义:
细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR 作为 P450 酶系的重要一员,催化氧化型 P450 还原再生。
测定原理:
NCR 催化 NADPH 还原氧化型细胞色素 C ,还原型细胞色素 C 在 550nm 处有特征吸收峰;通过测定 550nm吸光度的增加速率,来计算 NCR 活性。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。NADPH-细胞色素C 还原酶测定操作:1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min ,调节波长到 550 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 10μL 蒸馏水、180μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂
四,迅速混匀后于 550nm 处测定2min 内吸光值变化,第 10s 和第 130s 吸光值。△A 空白管=A2-A1。
4. 测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 10μL 提取液、180μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂四,迅速混匀后于 550nm 处测定2min 内吸光值变化,第 10s 和第 130s 吸光值。△A 测定管=A4-A3。注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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