α-甘露糖苷酶(α-Mannosidase,α-Man)活性测定试剂盒微板法/48样
产品简介:
α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24,α-Man)是参与植物体内 N-聚糖加工的关键酶之一。是植物细胞壁糖蛋白代谢过程中的关键性糖苷酶,在分生组织的生长、果实的成熟软化、种子的萌发等生理进程中起重要作用。α-甘露糖苷酶(α-Man)催化对硝基苯酚-α-D-吡喃甘露糖苷产生对硝基苯酚(PNP),该产物在405nm处有特征吸收峰,通过测定405nm光吸收增加速率,即可计算α-甘露糖苷酶活性。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂mL×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加1.1mL蒸馏水超声溶解备用。 |
试剂二 | 液体10mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂三 | 液体10mL×1瓶 | 4℃保存 |
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标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂 |
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、天平、研钵、冰和蒸馏水。
α-甘露糖苷酶(α-Man)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g) ,加入 1mL 提取液, 进行冰浴匀浆。 12000rpm ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例提取
② 细菌或细胞:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞,加入 1mL 提取液,
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W ,超声 3s ,间隔 10s ,重复 30 次);
12000rpm ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例提取。
③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
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