Mg2+- ATP 酶试剂盒微板法/48样
产品简介:
Mg2+-ATP 酶与细胞维持胞内 Mg2+浓度有关, 可在运输 Mg2+的同时催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。通过测定无机磷的量可确定该酶活性高低。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 提取液90mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉 体 m g × 1 瓶 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加20mL提取液,混匀溶解备用。 |
试剂二 | 粉体×1瓶 | -20℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加15mL提取液,混匀溶解备用。 |
试剂三 | 液体5mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | A.粉体mg×1瓶 B液体1mL×1瓶 | 4°℃保存 | 临用前向A试剂中加0.9mL的B液,再加11.6mL的蒸馏水,混匀溶解备用。 |
标准品 | 粉体mg×1支 | 4°℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂。 |
[注]:全程操作需无磷环境;试剂配置好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
Mg2+-ATP酶活性检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃×12000 rpm 离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提取。
②细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液, 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W, 超 声 3s, 间隔10s, 重复30次);12000rpm 4℃离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL) 为500~1000:1的比例进行提取。
③液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
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