延胡索酸酶(富马酸酶)活性测定试剂盒微板法/96样
产品简介:
延胡索酸酶又名延胡索酸水化酶(EC4.2.1.2),存在于线粒体中的富马酸酶是柠檬酸循环中的关键酶之一,存在于胞质中的富马酸酶与氨基酸和富马酸酯的代谢关系密切。
在人类中,该酶缺失会导致严重的健康问题,例如胎儿脑畸形,肌张力低下等。延胡索酸酶催化延胡索酸转化成 L-苹果酸,L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下,同时使 NAD+还原成NADH,通过检测 NADH 在 340nm 的增加速率得出延胡索酸酶的活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体120mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂二 | 液体30mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂三 | 液体0.5mL×1瓶 | -20℃保存 |
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试剂四 | 粉体mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 2.1mL蒸馏水溶解,可分装保存。 |
试剂五 | 粉体mg×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.1mL蒸馏水溶解,-20℃保存。 |
试剂六 | 液体5μL×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部,再加1.1mL蒸馏水溶解,-20℃保存。 |
试剂七 | 液体13mL×1 瓶 | -20℃保存 |
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试剂八 | 液体mL×1 支 | -20℃保存 |
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所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵。
延胡索酸酶活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
线粒体制备(提示:整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境):
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一 ,用冰浴匀浆器或研钵匀浆,转移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
② 弃沉淀,上清液移至另一离心管中,4℃×12000g 离心 10min。上清液即胞浆提取物,可用于测定胞浆中的延胡索酸酶(此步可选做),沉淀为线粒体。
③ 在沉淀(线粒体)中加入 200μL 试剂二和 2μL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W ,超声 3s ,间隔 10 秒,重复 30 次) ,液体置于冰上用于线粒体中延胡索酸酶活性测定。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例进行提取,或按照细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000: 1 的比例进行提取。
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