NAD苹果酸酶(NAD-ME)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和 CO2 ,以及伴随 NAD(P)+ 的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测 定较 多 , 已经成为抗氧化研 究 的热 点 。根据辅酶专一性和对底物特异性 的不 同 ,可将 ME 分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理:
NAD-ME 催化 NAD+还原成 NADH ,在 340nm 下测定 NADH 增加速率。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。测定步骤:
操作表
试剂名称(μL)
测定管
试剂一
600
试剂二
225
试剂三
30
试剂四
15
样本
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,混匀,立即记录 340 nm 波长下初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
如果 ΔA<0.005 ,可将反应时间延长到 2 分钟或 5 分钟。
上海酶联生物科技有限公司
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