胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
ICDHc(EC 1.1.1.42 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH 。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
测定原理:
利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:操作表
试剂名称(μL)
测定管
试剂一
750
试剂三
10
试剂四
样本
30
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,加样本的同时开始计时;混匀,在 340nm 波长下记录 20s 时的初始吸光度 A1 和 2min20s 时的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
1、若 A2-A1 大于 0.5 ,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、若 A2-A1 小于 0.005 ,可延长反应时间到 5min 或 10min。
上海酶联生物科技有限公司
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