胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测定试剂盒/微量法/96样 新品

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

ICDHc（EC 1.1.1.42 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸，同时还原 NADP+生成 NADPH 。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变。

测定原理：

利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应，在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min  以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂一，混匀后立即记录 340nm 处 20s 后吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

1、若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

2、若 A2-A1 小于 0.005 ，可延长反应时间到 5min 或 10min。