γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测定试剂盒/微量法/96S 新品

γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测定试剂盒/微量法/96S

测定意义：

GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL 基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL 活性高低对 GSH 含量和 GSH/GSSG 比值有重要影响。

测定原理：

在 ATP 和 Mg2+存在下，GCL 催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时 ATP 去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出 GCL 活性。

自备仪器和用品：

冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。

GCL 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 660nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取 1.5mLEp 管，依次加入试剂一 48µL 、试剂二 52µL 、试剂三 12µL 和蒸馏水 24µL，混匀后盖紧，37℃水浴准确反应 15 min；再加入试剂四 60µL，混匀后，室温（25℃左右）8000g ，离心 10 min，取上清 100µL，加入试剂五 100µL，混匀后盖紧，45℃水浴 10min，冷却后测定 660nm 处光吸收，记为 A 空白管。

3. 测定管：取 1.5mLEp 管，依次加入试剂一 48µL 、试剂二 52µL 、试剂三 12µL 和上清液 24µL，混匀后盖紧，37℃水浴准确反应 15 min；再加入试剂四 60µL，混匀后，室温（25℃左右）8000g ，离心 10min，

4. 取上清 100µL ，加入试剂五 100µL ，混匀后盖紧，45℃水浴 10min ，冷却后测定 660nm 处光吸收，记为 A 测定管。

注 意：

空白管只需要测定一次。