硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶,属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员,与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与GR 活性类似,催化 GSSG 还原生成GSH,是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
测定原理:
TrxR 催化 NADPH 还原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率,即可计算 TrxR 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏。TrxR 测定操作:1. 分光光度计预热 30 min ,调节波长到 412nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂一在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)预热 30min。
3. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100μL 试剂二,100μL 试剂三,700μL 试剂一,100μL 上清液,迅速混匀后于 412 nm 测定 10 s 和 310 s 吸光度,记为 A3 和 A4 。△A 测定管=A2-A1。
注 意:
1. 测定前须先取 1~2 个样做预实验,哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时,一般须用蒸馏水稀释 5倍左右;测定过程操作须迅速。
2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
上海酶联生物科技有限公司
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