谷氨酸脱氢酶(GDH)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
GDH(EC 1.4.1.2 )广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理:
GDH 催化 NH4+ 、 α-酮戊二酸和 NADH ,生成谷氨酸和 NAD+ ,引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm吸光度的下降速率,计算 GDH 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配好后 12h 内用完);
(2)取 0.05mL 样本和0.95mL 工作液于 1mL 比色皿中,混匀,加工作液的同时开始计时,在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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