脯氨酸脱氢酶(ProDH)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
ProDH 是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸,降低 ProDH 活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。
测定原理:
利用异硫氰酸甲酯检测 ProDH 催化的脱氢反应,600nm 处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 600nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)混合液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液(见试剂的组成和配制),临用前根据用量按照试剂二(V):试剂三(V):试剂四(V)=7.2(mL):0.9(mL):0.9(mL)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少),置于 30℃水浴5min;
(2)试剂五的配制:取试剂五一支,临用前加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用,现配现用。
(3)1mL 玻璃比色皿中加入 175μL 样本、75μL 试剂五和750μL 混合液,混匀,立即记录 600nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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