土壤几丁质酶测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨) ,以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在 585nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿,甲苯、蒸馏水。测定操作表:
对照管
测定管
土样(g)
0.2
甲苯(μL)
30
混匀,25℃静置 15min
蒸馏水(μL)
200
试剂一 (μL)
混匀,37℃培养 24h
400
4000rpm ,4℃, 离心 10min ,取上清 300μL 于新的 EP 管中
试剂二(μL)
混匀,沸水浴 5mi
试剂三(μL)
900
混匀,37℃显色 20min ,取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中,蒸馏水调零,测定 585nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,ΔA=A 测定管-A 对照管。
注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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