肉桂醇脱氢酶(CAD)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
CAD 是木质素生物合成途径中的关键酶之一,是木质素单体合成反应中的最后一步,催化多种不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
测定原理:
CAD 催化肉桂醇和 NADP 生成肉桂醛和 NADPH ,在 340nm 下测定 NADPH 生成速率,即可反映 CAD 活性。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:
1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2 、样本测定
(1)在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀,室温使用涡旋振荡仪振荡溶解 15min,如未溶解可适当延长振荡时间;置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;现配现用(配好后24h 内用完)。
(2)在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和950μL 试剂二,混匀,立即记录 340nm 处初始吸光值 A1 和5min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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