产品信息：
产品名称 | C3H/10T1/2 Clone8 小鼠胚胎成纤维细胞 | 英文名称 | C3H10T12Clone8:C3H/10T1/2 Clone8 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 | 生长特性 | 贴壁生长 |
货号 | A01X1041 | 种属 | 小鼠 |
种属:小鼠
生长特性:贴壁细胞
细胞形态:成纤维细胞样
冻存条件:冻存液： 通用血清型程序冻存液
温度：液氮
培养方案A（默认）:生长培养基：MEM（含NEAA）+10% FBS +1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO?，5%, 温度：37℃
推荐传代比例:1:2-1:4
推荐换液频率:2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述:C3H/10T1/2, Clone 8细胞是由C·Reznikoff等人于1972从C3H系小鼠胚胎细胞分离。C3H/10T1/2, Clone 8细胞对过度长满的细胞有丝分裂抑制非常敏感，在同源小鼠中不产生肿瘤，无自然转化的背景；C3H/10T1/2, Clone 8细胞也不含明显内源性转化鼠类白血病或肉瘤病毒。
年龄（性别）:Embryo;Sex unspecified
组织来源:胚胎
细胞类型:自发永生化细胞
生物安全等级:BSL-1
致瘤性:No, in immunosuppressed mice. Yes, in semisolid medium.
保藏机构:ATCC; CCL-226 ECACC; 99072801
培养条件与培养基
培养基配方：推荐使用 MEM（含 NEAA）基础培养基，添加 10% 胎牛血清和 1% 非必需氨基酸；也可使用 DMEM-H（高糖）替代 MEM，血清建议选用南美胎牛血清。
培养环境：气相为 95% 空气 + 5% CO?，温度 37℃，饱和湿度培养箱。
换液频率：每 2-3 天换液一次，若培养基出现浑浊或变色需立即更换。
传代操作步骤
消化处理：弃去旧培养基，用不含钙镁的 PBS 洗涤 1-2 次，加入 0.25% 胰酶-0.53mM EDTA（T25 瓶加 1-2ml），37℃ 消化 1-2 分钟，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时终止消化。
终止消化与收集：加入 5ml 以上含 10% 血清的完全培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液，1000RPM 离心 5 分钟，弃上清。
分瓶接种：用完全培养基重悬细胞，按 1:2 到 1:5 的比例分到新培养瓶（推荐接种密度 2000 个细胞/cm2），补加培养基至 5-6ml，十字摇匀后放入培养箱。
传代时机：细胞密度达 80%-90% 时进行传代，避免过度融合导致自发转化或细胞状态下降。
冻存与复苏操作
冻存方法：细胞消化后离心收集，用冻存液（90% 完全培养基 + 10% DMSO 或 MEM + 10% FBS + 10% DMSO）重悬，调整细胞密度至 0.8-1.5×10? 细胞/ml，分装冻存管，放入程序降温盒后置于 -80℃ 过夜，再转入液氮保存。
复苏方法：冻存管 37℃ 水浴快速解冻，加入 5ml 培养基混合均匀，离心弃上清，重悬后接种于 T25 瓶，培养过夜后换液检查细胞状态。
关键培养要点与注意事项
接种密度控制：严格控制接种密度，避免过度长满（建议 80% 汇合度时传代），否则可能导致细胞对有丝分裂抑制敏感或自发转化。
血清与培养基一致性：避免更换不同批次血清或培养基，否则可能影响细胞形态和转染效率，甚至导致细胞无法存活。
质量控制：该细胞 STR 鉴定为小鼠细胞，无交叉污染，支原体、细菌、真菌检测阴性，生物安全等级 BSL-。
常见问题处理：培养中若出现黑色颗粒或小黑点，可能为细胞碎片或污染，需检查操作无菌性；收到细胞后先消毒表面，静置 2-3 小时再处理。
应用与特性
该细胞系常用于脂肪代谢、细胞分化机制研究，也可作为饲养层细胞支持胚胎干细胞生长（需丝裂霉素 C 处理灭活）。
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关键字： C3H/10T1/2 Clone8;小鼠胚胎成纤维细胞;贴壁细胞;
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