顺乌头酸酶检测试剂盒（分光光度法 50T/48S） 新品

顺乌头酸酶（ACO）活性检测试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

顺乌头酸酶（aconitase），三羧酸循环中的酶，催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化，在顺乌头酸酶作用下，通过脱水与加水反应，使羟基由β碳原子转移到α碳原子上，生成易于脱氢氧化的异柠檬酸，为进一步的氧化脱羧反应作准备。

测定原理：

ACO催化柠檬酸转化成异柠檬酸，异柠檬酸氧化脱羧将NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

组成：

顺乌头酸酶（ACO）活性检测试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

顺乌头酸酶（aconitase），三羧酸循环中的酶，催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化，在顺乌头酸酶作用下，通过脱水与加水反应，使羟基由β碳原子转移到α碳原子上，生成易于脱氢氧化的异柠檬酸，为进一步的氧化脱羧反应作准备。

测定原理：

ACO催化柠檬酸转化成异柠檬酸，异柠檬酸氧化脱羧将NAD+ 还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。

组成：

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加3ml蒸馏水充分溶解；现配现用

试剂七：粉剂×1支，4°保存；临用前加36ml试剂四充分溶解；

工作液：临用前在36ml试剂七中加入3ml蒸馏水、3ml试剂四、3ml试剂五、3ml试剂六充分混匀

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

1. 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10μl 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2. 将匀浆转入离心管内600xg，4℃离心5min。

3. 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000xg，4℃离心10min。

4. 上清液即胞浆提取物，可用于测定胞质顺乌头酸酶活性。

5. 在步骤④的沉淀中加入200μl试剂二和2μl 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体顺乌头酸酶活性测定。

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