土壤硝酸还原酶（S-NR）试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。
测定原理：
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
试剂的组成和配制：
产品名称 | SSQ012-100T/48S | Storage |
试剂一：液体 | 12ml | -20℃ |
试剂二：液体 | 8ml | -20℃ |
试剂三：液体 | 9ml | 4℃ |
试剂四：液体 | 9ml | 4℃ |
试剂五：标准品储备液 | 1ml | -20℃ |
说明书 | 一份 |
试剂三：液体9ml×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。
0.1μmol/ml标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取 0.1ml 加蒸馏水定容至 10ml。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
试剂名称 | 1ml带盖离心管 |
测定管 |
| 测定管 | 测定管 |
风干土样（g） | 0.06 | 0.06 |
|
|
0.1μmol/ml标准液（μl） |
|
| 60 |
|
蒸馏水（μl） |
| 225 |
| 285 |
试剂一（μl） | 225 |
| 225 |
|
试剂二（μl） | 75 | 75 | 75 | 75 |
混匀后，盖盖后37℃水浴24h，8000g 25℃离心10min，取上清液
上清液（μl） | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂三（μl） | 85 | 85 | 85 | 85 |
试剂四（μl） | 85 | 85 | 85 | 85 |
混匀，25℃显色20min，4000g，25℃离心10min，取200uL上清液至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
注意事项
务必先做2个样本的预测定，少部分土壤由于样本特殊性可能出现测定管小于对照管，请及时与我司技术支持联系，以获得针对样本特殊性的调整测定方法。
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