土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理：
亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
试剂的组成和配制：
产品名称 | SSQ076-50T/24S | Storage |
试剂一：液体 | 10ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 1瓶 | 4℃ |
试剂三：液体 | 10ml | 4℃ |
试剂四：液体 | 25ml | 4℃避光 |
试剂五：液体 | 25ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加10ml蒸馏水溶解。
试剂三：液体10ml×1瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解；
试剂四：液体25ml×1瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解；
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。
自备仪器和用品：
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1ml玻璃比色皿。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定操作表：
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
风干土样（g） |
| 0.1 | 0.1 |
蒸馏水（μl） |
| 200 |
|
试剂一（μl） | 200 |
| 200 |
试剂二（μl） | 200 | 200 | 200 |
混匀后，25℃反应1h |
试剂三（μl） | 200 | 200 | 200 |
充分震荡30S，10000rpm，4℃，离心10min |
上清液（μl） | 500 | 500 | 500 |
工作液（μl） | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混匀，用蒸馏水调零，静置3min后测定540nm处各管吸光值，分别记为A空白管、A对照管、A测定管。 |
计算公式：
标准曲线：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x为标准品浓度（μmol/ml），y为吸光值（A标准管-A空白管）。
酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR（μmol /d /g土样）=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088] ×V标÷1.5562÷W÷T
= 3.084×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V标：标准液体积，0.2ml； W：样本质量，g。
注意事项：
配制好的工作液3天内使用完。
若吸光值超过3，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
标准曲线线性范围为0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。
A空白管-（A测定管-A对照管）线性范围为0.02-3。
关键字： 土壤亚硝酸还原酶;
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