抗脂质过氧化能力/LPO抑制率测定试剂盒分光法/48样
产品简介:
过氧化脂质具有破坏生物膜的作用,导致细胞破坏、机体损伤。以硫代巴比妥酸 (TBA) 法 测定外源添加的脂质过氧化体系的产物丙二醛,终形成在535nm 处有特征吸收峰的有色 产物。当加入抗脂质过氧化物质(LPO) 时,它能抑制外源脂质过氧化体系中产物丙二醛的 产生,从而使溶液在535nm 处光吸收减弱。故可以通过测定 A535 值来评价抗脂质过氧 化物质的能力即抑制脂质过氧化 (LPO) 能力。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、可调式移液器、天平、离心机。
抗脂质过氧化能力( L P O抑制率)的测定:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备:
①组织样本称取0 . 1g 样本(若是干样可取0.02-0.05g), 加 入 1mL 的 8 0 % 乙 醇 ( 自 备)进行匀浆,匀浆后转入2mL 离心管中;于50℃,200-300W 条件下超声提取30min ( 间 隔 5min 振荡混匀一次)。若有损耗需用80%乙醇定容至1mL,12000rpm室温离 心 10min, 取上清待测。
②液体:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
①可见分光光度计预热30min 以上,调节波长至535nm, 蒸馏水调零。
②不同样本清除能力不一,可先选取2个样本做检测,在 EP 管中依次加入下列试剂:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 160 |
|
试剂一 |
| 160 |
试剂二 | 160 | 160 |
试剂三 | 160 | 160 |
混匀,避光于37℃孵育30min。 |
试剂四 | 320 | 320 |
95℃孵育15min,迅速冷却,5000r/min离心10min,取上清700μL至1mL玻璃比色皿(光径1cm)中,于535nm测定。 |
[注]: 若 A 测定值小于0.15,可对样本用提取液即80%乙醇稀释后再测定;或若 A 测定大于等于空白管,需加大样本取样质量 W, 则改变后的 D和 W 需代入公式计算。
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