腺苷脱氨酶(ADA)活性测定试剂盒分光法/48样
产品简介:
腺苷脱氨酶(ADA ,EC 3.5.4.4)是一种琉基酶,是嘌呤核苷酸代谢的关键酶,与机体细胞的免疫活性有重要关系。腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷水解,产生次黄嘌呤核苷和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 ( μ L) | 测定管 | 对照管 |
上清液(上步反应) | 60 | 60 |
蒸馏水 | 180 | 180 |
试剂四 | 240 | 240 |
试剂五 | 120 | 120 |
试剂六 | 240 | 240 |
充分混匀,37℃放置20min后,全部液体转移至1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于630nm处读取吸光值A,ΔA=A测定管-A 对照管(每个样本做一个自身对照)。 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
腺苷脱氨酶( ADA )活性测定:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织(水分足的样本可取 0.2-0.5g), 加入1mL提取液;进行冰浴匀浆。
12000rpm ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例提取。
② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
附:标准曲线制作过程:
1. 标准品母液(10μg/mL的氨(分子量是18)),把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10μg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2. 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。
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