天冬酰胺酶(ASNase/asparaginase)活性测定试剂盒分光法/48样
产品简介:
天冬酰胺酶 (EC 3.5.1.1,ASNase)是一种酰胺水解酶,能够将 L-天冬酰胺脱去氨基生成 L-天冬氨酸和氨。该酶具有抗肿瘤活性,在食品和医药等领域应用十分广泛。天冬酰胺酶 (ASNase) 催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在强碱的环境下与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液颜色稳定。其在630nm 处有特征吸 收峰,通过检测氨增加的速率,即可计算该酶活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 液体20mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 粉剂mg×2瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉体落入底部,每瓶再加 11mL蒸馏水溶解备用。 |
试剂三 | 液体20mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | 液体24mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂五 | 液体12mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂六 | A:液体7mL×4瓶 | 4℃保存 | 临用前取60μL的B液进一瓶A液中,混匀 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、 常温离心机、移液器、蒸馏水、振荡仪。
天冬酰胺酶 ( ASN ase )活性测定:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
称取约0 . 1g 组织(水分足的样本可取0.2-0.5g), 加 入 1mL 提取液;进行冰浴匀浆。 12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 也可以按照组织质量 (g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例提取。
②细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s,重复30次);12000rpm4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液 (mL) 为500~1000:1的比例进行提。
③液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
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