Ca2+—ATP酶试剂盒分光法/24样
产品简介:
Ca²+是细胞内重要的信号分子,细胞质基质始终维持在一个较低水平的Ca²+浓度,Ca²+浓度的维持主要由Ca²+-ATP 酶来维持,该酶可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。通过测定无机磷的量来确定该酶活性高低。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 提取液60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加8mL提取液,混匀溶解备用。 |
试剂二 | 粉体×1瓶 | -20℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加15mL提取液,混匀溶解备用。 |
试剂三 | 液体4mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂四 | A:粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前试剂A中加2.9mL的B液,再加37.1mL的蒸馏水,混匀溶解备用。 |
B:液体3mL×1瓶 |
标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂 |
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、 水浴锅、台式离心机、可调式移液 器、研钵、冰和蒸馏水。
Ca²+ATP酶活性检测:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
称取约0 . 1g 组织,加入1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm离心1 0min,取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提取。
②细菌/真菌样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液,
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重复30次);12000rpm 4℃离心10min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为500~1000:1 的比例进
行提取。
③液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
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