线粒体H+- ATP酶试剂盒分光法/24样
产品简介：
线粒体是细胞呼吸代谢的重要场所，位于线粒体内膜的 H+-ATP 酶是氧化磷酸化偶联的关键组分。H+-ATP 酶可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷，本试剂盒通过测定无机磷量来确定该酶活性高低。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液1 | 液体30mL×瓶 |
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提取液2 | 液体7mL×瓶 |
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试剂一 | 液14mL×瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，再加2mL蒸馏水，混匀溶解备用。 |
试剂三 | 液体3mL×1支 | 4℃保存 |
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试剂四 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落部，再加1.8mL蒸馏水，混匀溶解备用。 |
试剂五 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
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试剂六 | 液体5mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂七 | A:粉体mg×1瓶
B:液体2mL×1瓶 |
| 临用前加1.8 mL的B液，再加23.2mL的蒸馏水，混匀溶解备用。 |
标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液 器、研钵、冰和蒸馏水。
线粒体H+-ATP酶活性检测:
建议正式实验前选取2个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费!
线粒体制备
(提示：整个线粒体的提取过程须保持4℃低温环境):
①称取约0 .2g 组织或收集1000万细菌/细胞，加入1mL 提取液1,用冰浴匀浆器或
研钵冰浴匀浆，转移至离心管后于4℃×3000g 离心20min。
②小心吸取上清液(弃沉淀)移至另一离心管中，4℃×16000g 离心20min。用移液器 移除上清液(上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的 H+-ATP 酶
(此步可选做))。留下沉淀(沉淀即为线粒体)。
③在沉淀(线粒体)中加入200 μL 提取液2,超声波破碎(冰浴，功率20%或200W,
超 声 5s, 间 隔 3s, 重复30次),液体置于冰上用于线粒体 H+-ATP 酶活性测定。
[注]: 若增加样本量，可按照组织质量 (g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提 取，或按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL) 为500~1000:1的比例进行提取。
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