β-1,3-1,4-葡聚糖酶活测定试剂盒微板法/96样
产品简介:
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(又称地衣多糖酶;EC 3.2.1.73)是一类重要的水解酶,可以水解谷物 中的β-1,3-1,4-葡聚糖,其在食品、饲料和纺织等领域的具有重要应用价值。
β-1,3-1,4-葡聚糖酶水解底物葡聚糖产生还原性糖。利用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的量,在540nm 读取吸光值,进而得出β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体120mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加1.1mL蒸馏水,80℃水浴10min充分溶解,冷却至室温待用。 |
试剂三 | 液体30mL×1瓶 | 4°℃保存 |
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标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂 |
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。
β-1,3-1,4-葡聚糖酶(β-1,3-1,4-GA)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
取约0 . 1g 组织(水分充足的样本可取0.5g) 到研钵内,加入1mL 提取液,在冰上进行 冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 也可以按照组织质量 (g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例提取。
②细菌/细胞样本:
先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取500万细菌/真菌加入1mL 提取液;冰 浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率20%或200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重 复 3 0 次 ) ; 12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL) 为500~1000:1 的比例进行提取。
③液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需4℃×12000rpm, 离 心1 0min,
取上清液检测。
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