超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(NBT法)/分光光度法/48样
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.) ,O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-. ,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 560nm,蒸馏水调零。
2、将试剂二用蒸馏水稀释两倍,用多少配多少。(试剂二和蒸馏水 1 :1 稀释)。
3、将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶解(溶解后一周内用完),再用蒸馏水稀释 4 倍,用多少配多少(试剂四和蒸馏水 1 :3 稀释)。
4、测定前将试剂一、三和四在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 5min 以上。
5、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
50
蒸馏水
试剂三(稀释后)
工作液
800
试剂四
100
充分混匀,室温静置 30min 后,加入 1mL 玻璃比色皿,560nm 处测定各管吸光值 A。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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