IPTG诱导剂；异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 367-93-1 应用介绍 新品

IPTG的作用机制在原核生物中，乳糖操纵子是一个调控乳糖代谢的关键系统。在没有乳糖存在的情况下，lac操纵子受到lac阻遏蛋白（lac repressor）的抑制，阻止lac操纵子下游基因的转录。当乳糖存在时，乳糖会与lac阻遏蛋白结合，使其失去活性，从而允许lac操纵子下游基因的转录。IPTG是一种乳糖类似物，能够与lac阻遏蛋白结合，但不会被细菌代谢，因此可以持续诱导lac操纵子的表达。IPTG在蛋白质表达中的应用IPTG在蛋白质表达中的应用非常广泛，尤其是在重组蛋白的生产中。许多表达载体（如pET系列载体）利用lac操纵子作为启动子，通过IPTG诱导来控制外源基因的表达。具体步骤如下：转化与培养：将含有目标基因的表达载体转化到大肠杆菌中，并在适宜的条件下培养，使细菌生长到对数生长期。诱导表达：加入IPTG，通常浓度为0.1-1 mM，诱导lac操纵子，启动目标基因的表达。表达优化：通过调整IPTG浓度、诱导时间和培养条件，优化目标蛋白的表达量和溶解性。蛋白纯化：收集诱导后的细菌，通过裂解、离心、亲和层析等方法纯化目标蛋白。IPTG的优势稳定性高：IPTG在细菌体内不会被代谢分解，能够持续诱导基因表达，适合长时间表达实验。诱导效率高：IPTG与lac阻遏蛋白的结合亲和力高于乳糖，能够更有效地诱导基因表达。操作简便：IPTG可以直接加入培养基中，操作简单，无需复杂的设备。注意事项浓度选择：IPTG的浓度会影响目标蛋白的表达量和溶解性，需要根据具体实验条件优化。细胞毒性：高浓度IPTG可能对细菌生长产生一定的抑制作用，需谨慎选择浓度。成本：IPTG相对较贵，大规模表达时需考虑成本问题。其他应用除了在蛋白质表达中的应用，IPTG还被用于其他分子生物学实验，如lac操纵子的功能研究、基因调控机制探索等。此外，IPTG还可以用于其他原核生物的基因表达系统，如沙门氏菌、铜绿假单胞菌等。总结IPTG作为一种高效的诱导剂，在基因表达调控和蛋白质表达领域具有重要作用。通过合理使用IPTG，可以有效地控制目标基因的表达，为蛋白质生产和分子生物学研究提供有力支持。然而，在使用IPTG时，需注意其浓度、细胞毒性和成本等问题，以确保实验的顺利进行。