商品属性：
产品名称
出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157)检测试剂盒(荧光PCR法)
检测方法
荧光PCR法
货号
XG-P1517
应用范围
核酸的定性检测
规格
50T
用途
仅供科研研究实验
传染性对虾皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)检测试剂盒(荧光PCR法)是一种用于快速、准确检测对虾中IHHNV核酸的专业诊断工具。该试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度、高特异性和快速检测的特点，适用于对虾养殖场、水产检疫部门和科研机构进行IHHNV的早期筛查和确诊。
二、检测原理
荧光PCR技术基础：该试剂盒采用TaqMan探针法的实时荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光标记探针实现对IHHNV核酸的特异性扩增和检测。
工作原理：
提取样品中的病毒RNA
通过逆转录反应合成cDNA
使用特异性引物对目标序列进行PCR扩增
探针与目标序列结合后释放荧光信号
实时监测荧光信号变化，定量分析病毒载量
内标系统：试剂盒通常包含内源性内标(如对虾β-actin基因)或外源性内标，用于监控提取和扩增过程，避免假阴性结果。
三、试剂盒组成
主要组分：
IHHNV特异性引物探针混合液
RT-PCR反应缓冲液
逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶
dNTPs混合物
阳性对照(含IHHNV特异性片段)
阴性对照(无核酸水)
内标对照
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。运输过程中需使用干冰或冰袋保持低温。
四、样本采集与处理
适宜样本类型：
对虾幼体、仔虾或成虾的组织样本
首选样本：鳃组织、造血组织、表皮或全身匀浆
也可检测养殖水体或沉淀物中的病毒
样本采集方法：
活体取样：使用无菌工具采集约50-100mg组织
死亡个体：尽快取样(死后2小时内最佳)
样本立即置于RNA保存液中或-80℃冷冻保存
核酸提取：
使用配套提取试剂或商业化RNA提取试剂盒
提取过程需严格防止交叉污染
提取的RNA应尽快用于检测或-80℃保存
五、检测操作流程
试剂准备：
所有试剂完全溶解并混匀
在冰上配制反应体系
按说明书比例混合各组分
加样：
每反应孔加入规定体积的模板RNA(通常2-5μL)
设置阳性对照、阴性对照和空白对照
小心避免交叉污染
PCR扩增程序：
逆转录阶段：45-50℃ 10-30分钟
预变性：95℃ 2-5分钟
扩增循环：95℃ 10-15秒，60℃ 30-60秒，40-45个循环
荧光信号采集在延伸阶段进行
数据分析：
设定阈值线在指数扩增期
记录Ct值(循环阈值)
分析扩增曲线和熔解曲线特征
六、性能参数
灵敏度：可检测低至10-100拷贝/反应的IHHNV RNA
特异性：不与TSV、WSSV、YHV等其他对虾病毒发生交叉反应
重复性：Ct值变异系数(CV)通常<5%
线性范围：10^1-10^8拷贝/反应，相关系数R2>0.99
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