肠出血性大肠杆菌 O157:H7 检测试剂盒
一、核心检测目标:
病原体特征
O157:H7血清型:产志贺毒素(Stx1/Stx2)和溶血素(hlyA),引发出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征(HUS)。
靶基因:
rfbE(O157抗原特异性)
fliC(H7鞭毛蛋白基因)
stx1/stx2(毒力基因,需分型检测)。
产品名称 | 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 检测试剂盒 | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1543 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
方法原理
多重荧光PCR:单管同步检测O157:H7标志基因(FAM/HEX通道)及内标(Cy5通道)。
技术优势:灵敏度达1-10 CFU/g粪便,较传统培养法(24-48小时)提速至2小时。
二、试剂盒组分与操作
1. 核心组分
组分 功能说明
预混液 含热启动Taq酶、dNTPs、抗抑制缓冲液(适配粪便样本)
引物探针组 rfbE-FAM/fliC-HEX/stx1-stx2-VIC(可选毒力分型)
内标(IC) 人工合成DNA片段(Cy5通道),监控提取与扩增效率
阳性对照 灭活O157:H7(ATCC 43895标准株)
2. 操作流程
样本前处理:
粪便:1:10稀释后离心取上清,或使用增菌肉汤(TSB+新生霉素)培养6小时。
食品:25g样本+225mL mEC+n肉汤增菌。
核酸提取:磁珠法优先(兼容高脂/高色素样本)。
PCR程序:
95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles(FAM/HEX/Cy5同步采集)
三、性能与判读标准
1. 关键参数
指标 要求
灵敏度 ≤10 CFU/反应(增菌后)
特异性 不与O145:H28等STEC交叉
抗干扰性 耐受20%胆汁/血红蛋白
2. 结果解读
阳性:
rfbE(FAM)Ct≤35 且 fliC(HEX)Ct≤35 → 确认O157:H7。
stx1/stx2阳性提示高毒力株(需报告临床预警)。
无效检测:内标Ct>35(需复查提取步骤)。
四、注意事项
采样要求
腹泻患者:发病3天内粪便样本(毒素分泌高峰期)。
食品:优先检测牛肉馅、生乳、芽苗菜。
局限性
无法区分活菌/死菌(建议结合培养验证)。
非O157 STEC(如O104:H4)需额外引物组。
生物安全
实验后需121℃高压灭菌废弃物(生物安全等级2)。
五、应用场景
临床诊断:快速鉴别出血性腹泻病原(区别于志贺菌、空肠弯曲菌)。
食品安全:肉类加工厂HACCP关键控制点监测。
暴发调查:PFGE分型前初筛(需保存阳性样本)。
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