商品属性：
产品名称 | 产气荚膜梭菌检测试剂盒 | 检测方法 | 荧光PCR法 |
货号 | XG-P1546 | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
规格 | 50T | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测目标与临床意义
产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）
主要毒素基因：
cpa（α毒素，磷脂酶C，所有菌株携带）
cpb（β毒素，A/B型菌株）
etx（ε毒素，B/D型菌株）
iap（β2毒素，部分致病株）
致病关联：
食物中毒（肠毒素cpe基因）
气性坏疽（伤口感染）
坏死性肠炎（动物）
技术原理
多重荧光PCR：
通道1（FAM）：cpa（种属鉴定）
通道2（HEX）：cpe（肠毒素检测）
可选通道（CY5）：cpb/etx（分型检测）
灵敏度：102-103 CFU/g（直接检测），10 CFU/g（增菌后）
二、试剂盒组成与样本处理
核酸提取模块 含溶菌酶+蛋白酶K的革兰氏阳性菌破壁系统
PCR预混液 含抗抑制剂（兼容粪便、组织等复杂基质）
引物探针混合液 四通道配置（FAM/HEX/CY5/ROX内标）
对照系统 阳性对照（ATCC 13124）、阴性对照、提取对照（ZymoBIOMICS标准品）
样本类型与处理
临床样本：
粪便（推荐1:10稀释降低抑制物）
伤口分泌物（需厌氧运输培养基）
食品样本：
肉类制品（25g+225mL强化梭菌培养基，37℃厌氧增菌8h）
乳制品（离心富集脂质层中的芽孢）
三、标准化检测流程
操作步骤
核酸提取
破壁关键：95℃ 10min+冰浴骤冷（促进芽孢DNA释放）
磁珠法提取（20min完成，洗脱体积50μL）
PCR反应体系
25μL体系：
预混液12.5μL + 引物探针混合液3μL + 模板5μL + 补水4.5μL
扩增程序：
50℃ 2min → 95℃ 10min → 45×[95℃ 15sec → 60℃ 1min]（四通道采集）
结果判读标准
检测靶标 阳性Ct值
cpa ≤35
cpe ≤35
cpb ≤35
四、质量控制与注意事项
关键质控要求
提取效率：内标（ROX）Ct值应≤30，否则需重复提取
交叉验证：
阳性样本建议接种TSC培养基（黑色菌落+双溶血环）
可疑结果（Ct 35-38）应进行Nagler试验（卵黄琼脂抑制试验）
2025年技术升级
数字PCR定量：可选ddPCR模块，绝对定量毒素基因拷贝数
快速检测版：结合RPA等温扩增，15分钟出结果（限cpa检测）
五、应用场景与局限性
典型应用
食源性疾病暴发调查：同步检测cpa+cpe，2小时锁定致病源
兽医诊断：鉴别etx阳性菌株（羔羊痢疾等）
局限性说明
分型限制：需单独引物组区分C/D型菌株
活菌鉴别：建议结合选择性培养（如卵黄琼脂毒素表型验证）
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