病毒性出血性败血症病毒(VHSV)检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

商品属性：

检测目标与流行病学意义

1.1 病毒特征

分类学：弹状病毒科（Rhabdoviridae），粒外弹状病毒属（Novirhabdovirus）

基因靶标：

G基因（编码糖蛋白，血清型特异性）

N基因（编码核蛋白，属保守区域）

宿主范围：

主要感染鲑科鱼类（虹鳟、大西洋鲑等）

可经水体、渔具跨物种传播

1.2 技术优势

四重检测体系：

FAM：VHSV-IVb型（高致病株）

HEX：通用型检测（所有基因型）

CY5：鱼类β-actin内参

ROX：过程控制（MS2噬菌体）

灵敏度：5拷贝/μL（比OIE推荐的qPCR方法高10倍）

二、试剂盒组成与样本处理

2.1 核心组分（96测试/盒）

组分 技术特性

核酸提取试剂 含鱼类组织专用裂解缓冲液（破除粘多糖干扰）

RT-PCR预混液 含逆转录酶+HotStart Taq（支持一步法）

引物探针组 四通道设计（适配ABI QuantStudio 5等机型）

质控系统 阳性对照（VHSV-DK-3592株）、阴性对照（SPF鱼组织提取物）

2.2 样本采集规范

最佳样本：

濒死鱼：肾、脾、脑（病毒载量最高）

无症状鱼：鳃部粘液拭子

保存运输：

RNA保护液（如RNAlater）中4℃保存≤72h

远程运输需干冰（-80℃冻存避免反复冻融）

三、标准化检测流程

3.1 操作步骤（全程约3小时）

核酸提取：

组织匀浆：50mg组织+1mL裂解液（含β-巯基乙醇）

磁珠法纯化（20μL洗脱体积）

RT-qPCR：

反应体系（25μL）：

预混液12.5μL + 探针混合液2μL + 模板5μL + 无核酸酶水5.5μL

扩增程序：

50℃ 15min → 95℃ 3min → 45×[95℃ 10sec → 60℃ 45sec]（四通道采集）

3.2 结果判读标准

通道 Ct值范围 判定依据

FAM(IVb) ≤35 高致病株感染

HEX(通用) ≤35 VHSV阳性（需分型）

CY5(内参) 22-28 样本质量合格

ROX(过程) 30±2 提取效率正常

四、质量控制与技术创新

4.1 质控要点

抑制物监控：ROX通道Ct值>35需稀释复测

交叉验证：

阳性样本应进行病毒分离（EPC细胞培养）

可疑结果建议Sanger测序（G基因片段）

4.2 2025年升级

微流控芯片版：

集成提取与检测（1小时完成）

野外适用（-20℃至45℃环境稳定性）

CRISPR辅助：

新增Cas12a荧光报告系统（肉眼判读）

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